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一種制備高純度胰激肽原酶原料藥的方法

公開(公告)號 CN101073666A  
公開(公告)日 2007.11.21  
申請(專利)號 CN200710098289.5  
申請日期 2007.05.11  
專利名稱 一種制備高純度胰激肽原酶原料藥的方法  
主分類號 A61K38/48(2006.01)I  
分類號 A61K38/48(2006.01)I;A61K9/19(2006.01)I;C12N9/64(2006.01)I;A61P3/06(2006.01)I;A61P3/10(2006.01)I;A61P7/02(2006.01)I;A61P9/10(2006.01)I;A61P9/12(2006.01)I;A61P25/02(2006.01)I;A61P27/02(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 上海麗珠制藥有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 萬龍巖;陳一平;楊志建  
地址 201206上海市浦東金橋出口加工區(qū)桂橋路1150號  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 北京泛華偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司  
代理人 郭廣迅  
國省代碼 上海;31  
主權(quán)項(xiàng) 一種制備高純度胰激肽原酶原料藥的方法,其特征在于包括以下步驟: 1.配制:配制0.15-0.5mol/L的NH4AC緩沖液和0.1-0.5mol/L的NH4AC緩沖液,調(diào)整至pH6.0,并測電導(dǎo)值; 2.層析: 2.1平衡:將裝有QAE-SepharoseFastFlow離子柱填料的層析柱,用pH6.0的0.15-0.5mol/L的NH4AC緩沖液平衡,直至進(jìn)出溶液pH值一致、電導(dǎo)值相同后平衡完畢; 2.2進(jìn)樣:調(diào)胰激肽原酶中間體的pH值與平衡液相近(6.1~6.2),電導(dǎo)值略低于平衡液電導(dǎo)值(略低0.2~0.3×104μs/cm),根據(jù)每升填料最大交換量2000萬單位計(jì)算上樣量并將上樣液上柱; 2.3洗滌:用pH6.0的0.15-0.5mol/L的NH4AC緩沖液沖洗柱子,同時用分光光度計(jì)跟蹤檢測流出液在280nm處的吸收值,沖洗至洗出液OD值低于0.5時停止; 2.4洗脫:用pH6.0的0.1-0.5mol/L的NH4AC緩沖液以500~600ml/min流速洗脫柱子,同時用分光光度計(jì)進(jìn)行跟蹤檢測其在253nm處的吸收值,收集峰液; 3.超濾脫鹽:將收集液加純化水超濾脫鹽濃縮,當(dāng)超出液電導(dǎo)值小于0.1×104μs/cm以下時,即可停止加純化水,繼續(xù)濃縮; 4.濃縮液過濾; 5.加輔料凍干; 6.過篩、分裝。  
摘要 本發(fā)明涉及一種制備高純度生物原料藥的方法,特別是一種高純度胰激肽原酶原料藥的方法。該方法由胰激肽原酶中間體在優(yōu)化的分離條件下,經(jīng)過QAE-Sepharose Fast Flow離子柱層析純化制得的激肽原酶的原料藥。該原料藥的純度高達(dá)75%以上,效價增加55單位/mg以上,比活達(dá)到350單位/mg蛋白以上。  
國際公布  
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