公開(公告)號(hào)
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CN101139387A
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公開(公告)日
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2008.03.12
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200710029286.6
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申請(qǐng)日期
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2007.07.20
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專利名稱
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一種重組可溶性人FGFR2胞外段及其生產(chǎn)方法與應(yīng)用
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主分類號(hào)
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C07K14/47(2006.01)I
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分類號(hào)
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C07K14/47(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61K36/17(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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暨南大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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洪 岸;汪 炬;張志成
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地址
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510630廣東省廣州市天河區(qū)石牌
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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廣州粵高專利代理有限公司
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代理人
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陳 衛(wèi)
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國(guó)省代碼
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廣東;44
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主權(quán)項(xiàng)
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一種重組可溶性人FGFR2胞外段的生產(chǎn)方法,其特征在于包括如下步驟: (1)目的基因截短型FGFR2的構(gòu)建; 根據(jù)截短型FGFR2胞外段氨基酸序列,按照大腸桿菌密碼子偏好性原則設(shè)計(jì)四對(duì)引物,四對(duì)引物序列分別如序列表NO:1~NO:4所示,由內(nèi)而外分別進(jìn)行四輪重疊延伸擴(kuò)增,首先是F1、R1互為模版擴(kuò)增,然后以第一輪產(chǎn)物作為模版,F(xiàn)1、R1作為引物進(jìn)行下一輪的擴(kuò)增,如此進(jìn)行4輪擴(kuò)增; (2)FGFR2雙突變型的構(gòu)建; 針對(duì)S252W和P253R雙突變的引物稱為M252+253_F和M252+253_R,序列如序列表NO:5所示; (3)雙酶切FGFR2基因與載體,連接構(gòu)建重組載體,轉(zhuǎn)化宿主菌,構(gòu)建FGFR2基因工程菌; (4)培養(yǎng)FGFR2基因工程菌,分離、清洗、溶解包涵體得到包涵體溶解液; (5)純化包涵體; (6)復(fù)性; (7)超濾、凍干得到可溶性人FGFR2胞外段。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種重組可溶性人FGFR2胞外段及其生產(chǎn)方法與應(yīng)用。本發(fā)明在通過大腸桿菌高效表達(dá)FGFR2的基礎(chǔ)上,對(duì)影響其復(fù)性效率的各種因素進(jìn)行了定性定量研究,確定了重組人可溶性人FGF受體胞外段體外變復(fù)性的較為合適的方法,使其復(fù)性效率達(dá)到10%~20%,且成本低、周期短、適合大規(guī)模生產(chǎn)。本發(fā)明利用游離的FGFRs的胞外段與血液及腫瘤組織中的FGFs結(jié)合,降低了游離FGFs的水平,從而競(jìng)爭(zhēng)性抑制了FGFs的信號(hào),有效抑制了腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移以及血管形成,并以S252W+P253R雙突變型FGFR2胞外段的效果最佳。
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國(guó)際公布
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