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四 濃縮、干燥及保存
(一)樣品的濃縮
一般抽提液的體積都比較大，應(yīng)先進(jìn)行濃縮處理。常用的濃縮方法有下面幾種。
1、沉淀法
在抽提液中加入適量的中性鹽或有機(jī)溶劑，使有效成分變?yōu)槌恋怼＝?jīng)離心或過濾收集的沉淀物，加少量緩沖液溶解后，再經(jīng)離心除去不溶物，獲得的上清液通過透析或凝膠過濾脫鹽，即可供純化使用。
2、吸附法
通過吸收劑直接吸收除去溶液分子使之濃縮。所用的吸收劑必須與溶液不起化學(xué)反應(yīng)，對(duì)生物大分子不吸附，易與溶液分開。常用的吸收劑有聚乙二醇，聚乙烯吡咯酮、蔗糖和凝膠等。使用聚乙二醇吸收劑時(shí)，先將生物大分子溶液裝入半透膜的袋里，外加聚乙二醇覆蓋置于４℃下，袋內(nèi)溶劑滲出即被聚乙二醇迅速吸去，聚乙二醇被水飽和后可更換新的，直至達(dá)到所需要的體積。
3、超過濾法
把抽提液裝入超過濾裝置，在空氣或氮?dú)鈮毫ο�，使小分子物質(zhì)（包括水分)通過半透膜（如硝酸纖維素膜)，大分子物質(zhì)留在膜內(nèi)。
4、透析濃縮法
把裝抽提液的透析袋埋在吸水力強(qiáng)的聚乙二醇（PEG)或甘油中，10ml抽提液可在１ｈ內(nèi)濃縮到幾乎無水的程度。這種方法的濃縮速度與透析袋的表面積以及PEG的數(shù)量有密切關(guān)系。
5、減壓蒸餾濃縮法
將抽提液裝入減壓蒸餾器的圓底燒瓶中，在減壓真空狀態(tài)下進(jìn)行蒸餾。當(dāng)真空度較高時(shí)，溶液的沸點(diǎn)可控制在３０℃以下。這種方法一般適用于常溫下穩(wěn)定性好的物質(zhì)。
6、冰凍干燥法
冰凍的抽提液在真空狀態(tài)下，可以由固體直接變?yōu)闅怏w。用此原理進(jìn)行濃縮，有效成分幾乎不會(huì)破壞。凍干機(jī)主要由低溫干燥箱、真空泵和冷凍機(jī)構(gòu)成。在凍干小體積樣品時(shí)，可以將其置玻璃真空干燥器中進(jìn)行。具體作法是，把分裝至小瓶中的樣品冰凍后放入裝有五氧化二磷或硅膠吸水劑的真空干燥器中，連續(xù)抽真空使其達(dá)到濃縮、干燥狀態(tài)。
（二)干燥
干燥是將潮濕的固體、半固體或濃縮液中的水分（或溶劑)蒸發(fā)除去的過程。生物大分子的制備得到所需的產(chǎn)品后，為了防止變質(zhì)，易于保存和運(yùn)輸，常需要干燥處理，最常用的方法是冷凍干燥和真空干燥，某些無活性核酸、微生物酶制劑和酪蛋白等工業(yè)產(chǎn)品則較多地應(yīng)用于噴霧干燥、氣流干燥等直接干燥法。
1、真空干燥
在相同溫度下，被干燥物質(zhì)所含水分或溶劑由于周圍空氣壓力的減少而蒸發(fā)速度增加。真空度愈高，溶液沸點(diǎn)愈低，蒸發(fā)愈快，其原理與真空濃縮（或稱減壓濃縮)相同。真空干燥適用于不耐高溫、易氧化物質(zhì)的干燥和保存，整個(gè)裝置包括干燥器、冷凝器及真空泵三部分。干燥器頂部連接一帶活塞的管道接通冷凝器，氣化后的蒸氣由此管道通過冷凝管凝聚，冷凝器另一端連接真空泵，干燥器內(nèi)常放一些干燥劑如五氧化二磷、無水氯化鈣等，以便樣品的干燥保存。
2、冷凍真空干燥
冷凍真空干燥，除利用真空干燥原理外，同時(shí)增加了溫度因素。在相同壓力下，水蒸汽壓隨溫度的下降而下降，故在低溫低壓下，冰很易升華為氣體。操作時(shí)，一般先將待干燥液體冷凍到冰點(diǎn)以下使之變成固體，然后在低溫低壓下將溶劑變成氣體而除去。此法干燥后的產(chǎn)品具有疏松、溶解度好、保持天然結(jié)構(gòu)等優(yōu)點(diǎn)，適用于各類生物大分子的干燥保存。
3、噴霧干燥
噴霧干燥是將液體通過噴灑裝置噴成霧滴后，與干燥介質(zhì)（一般為熱空氣)直接接觸干燥的方法。由于液體分散為霧滴時(shí)，直徑通常只有1～200微米大小，與熱空氣接觸面大，水分蒸發(fā)很快。在100℃的熱空氣中，只需不到一秒的時(shí)間即可干燥。因干燥時(shí)間短和水分蒸發(fā)時(shí)吸收熱量，使液滴及其附近的空氣溫度較低，故工業(yè)上常用于干燥微生物酶制劑和某些生化產(chǎn)品。
(三)保存
生物大分子的儲(chǔ)藏保存可分為干固態(tài)儲(chǔ)藏和液態(tài)儲(chǔ)藏兩種醫(yī)學(xué)全在,線bhskgw.cn。儲(chǔ)藏避免長期暴露于空氣中被微生物的污染。并應(yīng)注意低溫保存。
1、干態(tài)儲(chǔ)藏
干燥的制品一般比較穩(wěn)定，如制品含水量很低，在低溫情況下，生物大分子活性可在數(shù)個(gè)月甚至數(shù)年內(nèi)沒有顯著變化。儲(chǔ)藏方法也很簡單，只將干燥后的樣品置于干燥器內(nèi)（內(nèi)裝有干燥劑)密封，保存在0～４℃冰箱中即可。有時(shí)為了取樣方便和避免取樣時(shí)樣品吸水和污染，可先將樣品分裝到許多小瓶中，每次用時(shí)，只取出一小瓶。
2、液態(tài)儲(chǔ)藏
液態(tài)儲(chǔ)藏的優(yōu)點(diǎn)是減去干燥這一步驟，生物大分子的生理活性和結(jié)構(gòu)破壞較少，缺點(diǎn)是需要較嚴(yán)格的防腐措施，儲(chǔ)藏時(shí)間不能太長。如樣品量大時(shí)封裝運(yùn)輸不方便。液態(tài)儲(chǔ)藏注意事項(xiàng)如下：
（１)樣品不能太稀，必須濃縮至一定濃度后才能封裝儲(chǔ)藏，否則，容易引起生物大分子變性。
（２)一般需加入防腐劑和穩(wěn)定劑，常用防腐劑有甲苯、苯甲酸、氯仿、百里酚等。蛋白質(zhì)和酶常用的穩(wěn)定劑有硫酸銨糊、蔗糖、甘油等，如酶也可加入底物和輔酶以提高其穩(wěn)定性，此外鈣、鋅、硼酸等鹽溶液對(duì)某些酶也具有一定保護(hù)作用。核酸大分子一般保存在氯化鈉或檸檬酸與氯化鈉的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中。
（3)貯藏溫度要求較低，大多數(shù)在０℃左右冰箱保存即可，有的則要求更低。
