鵝巴氏桿菌病的確診方法有哪些?
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(1)微生物學(xué)檢驗(yàn)采取疑似巴氏桿菌病鵝的心血、肝、脾、腎等有病變的內(nèi)臟器官作為被檢病料。染色鏡檢：被檢病料做觸片或涂片，待自然干燥后用火焰固定，美藍(lán)染色或瑞氏、姬姆薩染色鏡檢，如見兩極染色卵圓形的小桿菌，或革蘭氏染色，鏡檢見有革蘭氏陰性、大小一致、卵圓形的小桿菌，可初步確診。分離培養(yǎng)：將被檢病料接種于
綿羊鮮血瓊脂培養(yǎng)基，或馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基，或血清瓊脂培養(yǎng)基等平皿，于37℃溫箱作用24小時，取其中細(xì)小、半透明、圓整、淡灰色、光滑的菌落接種于鮮血斜面培養(yǎng)基，供涂片鏡檢、生化反應(yīng)、動物接種、血清學(xué)檢驗(yàn)用。(2)動物接種將被檢鵝的心血或肝臟、脾臟磨細(xì)，用滅菌生理鹽水做1：5～1: 10稀釋，或?qū)?4小時斜面純培養(yǎng)物加入5～10毫升滅菌生理鹽水洗下，作為接種材料。青年鵝皮下或肌肉注射0.5—1．O毫升，或靜脈注射o．5毫升，或滴鼻0．1～0.2毫升，接種后于24～48小時死亡，剖檢見有典型鵝巴氏桿菌病病理變化即可確診。小白
鼠皮下或腹部注射0.2～o．5毫升，于24～48小時死亡，剖檢內(nèi)臟器官呈
敗血癥病理變化。(3)抗原型鑒定莢膜物質(zhì)(K)抗原型鑒定：將被鑒定菌株接種于馬丁氏瓊脂斜面培養(yǎng)基，于37℃溫箱作用24小時，用2～3毫升滅菌生理鹽水洗下，并收集于小試管中，置于56℃水浴箱中30分鐘，促進(jìn)莢膜物質(zhì)由菌體上解脫下來，然后經(jīng)6 000～8 000轉(zhuǎn)／分，離心30～60分鐘，上清液即為所制備的莢膜抗原。取被檢菌株莢膜抗原約0.3毫升，加入經(jīng)福爾馬林固定的0.2毫升洗凈的綿羊紅胞，充分混合后置37℃溫箱或水浴箱中作用1～2小時。然后經(jīng)3 000轉(zhuǎn)／分，離心30分鐘，棄上清液，沉淀紅細(xì)胞，再用約10毫升生理鹽水洗一次紅細(xì)胞，除去游離的未被紅細(xì)胞吸附的莢膜抗原。離心收集的致敏紅細(xì)胞，加入20毫升生理鹽水，配制成1%的致敏紅細(xì)胞懸液。各取1%的致敏紅細(xì)胞懸液0.5毫升，分別加入1: 40稀釋的各型抗血清(A、B、D、E、F)0.5毫升于試管內(nèi)，搖動試管，使之混合均勻，放置于室溫中2小時或37℃溫箱作用1小時后觀察。陽性者紅細(xì)胞呈凝集現(xiàn)象，陰性者紅細(xì)胞集中于試
管底部。判定結(jié)果的方法與一般紅細(xì)胞凝集反應(yīng)相同，通常以++號為標(biāo)準(zhǔn)。菌體(O)抗原型鑒定；將被鑒定的菌株接種于馬丁氏瓊脂斜面或克氏瓶，37℃溫箱作用24小時，每個斜面加入l毫升，每個克氏瓶加入20毫升含8. 5%
氯化鈉、0.02摩／升的磷酸緩沖液洗下苗苔，收集于試管中，置100℃水浴箱內(nèi)1小時，然后經(jīng)6 000～8 000轉(zhuǎn)／分，離心30分鐘，棄上清液，將沉淀物加入等量的緩沖液，并加入福爾馬林防腐，作為被檢“O”抗原。保存于冰箱內(nèi)備用。用8.5%氯化鈉鹽水配制的0.9%瓊脂糖或瓊脂澆入平板或玻璃板上，使其厚度為3～3.5毫米。凝固后用打孔器打孔，孔徑一般為4毫米，孔距為6毫米，中心孔加入被榆抗原，周圍孔加入標(biāo)準(zhǔn)血清，于37℃溫箱放置24～48小時。陽性者抗腺孔與抗體孔之間出現(xiàn)白色沉淀帶。(4)血清學(xué)檢驗(yàn)血清學(xué)診斷的目的，在于應(yīng)用血清學(xué)的凝集方法對鵝群進(jìn)行普查診斷和免疫效果的檢測。用標(biāo)準(zhǔn)A型、B型、D型、E型、F型5型菌株，或當(dāng)?shù)胤蛛x的菌株按上述介紹方法制備成1%的致敏綿羊紅細(xì)胞作為診斷抗原。試管法：將待檢
鵝血清做成不同稀釋度，分別加入等量診斷抗原，搖勻后放置于室溫中2小時或37℃溫箱作用1小時觀察。凝集價在1：40以上者為陽性反應(yīng)。玻片法：取被檢血清0.1毫升（約2滴)滴于玻片上，隨后加入等量診斷抗原，于15～20℃下?lián)u動玻片，使抗原與被檢血清均勻混合，1～3分鐘內(nèi)出現(xiàn)絮狀物，液體透明者為陽性。
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通過細(xì)菌分離培養(yǎng)
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實(shí)驗(yàn)室檢測
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