鵝副黏病毒病的確診方法是?
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實(shí)驗(yàn)室診斷鵝副黏病毒病的診斷可以根據(jù)
流行病學(xué)、臨診癥狀和病理變化綜合診斷。確診必須用雞胚進(jìn)行病毒分離，以及用血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、保護(hù)試驗(yàn)等血清學(xué)方法進(jìn)行鑒定。(1)病毒分離①病料采集與處理。分離病毒的病料應(yīng)采自早期典型病變的病鵝或死鵝，病程較長(zhǎng)的病鵝可能有并發(fā)癥，容易干擾病毒的分離。捕殺病鵝或死鵝應(yīng)用無菌手續(xù)采取腦或肝臟、脾臟組織。將病料磨細(xì)，加入滅菌生理鹽水或滅菌PBS液制成1：5～1：10的懸液，經(jīng)3 000轉(zhuǎn)／分，離心30分鐘后吸取上清液，按每毫升加入
青霉素、
鏈霉素各1 000單位，混勻后置4～8℃冰箱中作用2～4小時(shí)，或37℃溫箱中作用30分鐘后取少許液體分別接種于普通瓊脂斜面、鮮血瓊脂斜面和厭氧肉湯培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)觀察48小時(shí)，無菌生長(zhǎng)，凍結(jié)保存作為病毒分離材料。也可將上清液經(jīng)濾器過濾后，按每毫升加入青霉素、鏈霉素各500單位，混勻后置37℃溫箱中作用30分鐘，作為病毒分離材料。②雞胚接種。用4～6枚10～11日齡SPF雞胚，或4～6枚未經(jīng)新城疫免疫雞群的雞胚，每胚絨尿腔接種上述分離材料0.2毫升。接種24小時(shí)后每天照蛋4次，連續(xù)5天，通常于接種后36～72小時(shí)內(nèi)死亡。接種24小時(shí)以后死亡的雞胚，放置4℃的冰箱內(nèi)，氣室向上，冷卻4～12小時(shí)。用無菌手續(xù)收獲絨尿液，并做無菌檢查。渾濁的絨尿液和有菌生長(zhǎng)的絨尿液棄去不用。將澄清、無菌生長(zhǎng)和雞胚病變典型的絨尿液放置低溫冰箱凍結(jié)保存供進(jìn)一步鑒定。(2)病毒鑒定 毒株的鑒定最常用的方法是血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)。①血凝試驗(yàn)(HA)。將被檢的雞胚絨尿液病毒用生理鹽水按倍增方法稀釋成不同稀釋度，分別加入于8支小試管，每管0.5毫升或0. 25毫升。然后加入同等量的1%雞紅細(xì)胞懸液混勻后，置于20～30℃室溫中，15分鐘后檢查，每5分鐘觀察1次，觀察至60分鐘，判定結(jié)果。1%雞紅細(xì)胞系采取健康
雞血液。采血時(shí)需加入抗凝劑，以生理鹽水洗滌3～5次，每次以3 000轉(zhuǎn)／分，離心1 5分鐘，將血漿、白細(xì)胞等充分洗去，將沉積的紅細(xì)胞用生理鹽水稀釋成1%懸液。②血凝抑制試驗(yàn)(HI)。用已知抗鵝副黏病毒血清做血凝抑制試驗(yàn)，對(duì)雞胚的分離物做鑒定。先將已知抗鵝副黏病毒血清做以2為底數(shù)的對(duì)數(shù)稀釋，每個(gè)稀釋度分別加入兩排試管中，每管0. 25毫升。另設(shè)陰性血清對(duì)照管。第一排試管每管加入0. 25毫升含有4個(gè)凝集單位的被檢病毒液，第二排每管加入0. 25毫升含有4個(gè)凝集單位的已知鵝副黏病毒液。混勻后放置37℃溫箱作用20分鐘后加入1%雞紅細(xì)胞懸液，每管0.5毫升，混勻后置于20～30℃室溫中，15分鐘后每5分鐘觀察1次，觀察至60分鐘，判定結(jié)果。如已知抗血清對(duì)已知鵝副黏病毒的抑制價(jià)和被檢病毒的抑制價(jià)相近，而且都不被已知陰性血清所抑制，即可將被檢的病毒定為鵝副黏病毒。③微量血凝試驗(yàn)。存微量凝集板上，從第1～第12孔或根據(jù)所需要的孔數(shù)，用定量針頭每孔加入0. 025毫升生理鹽水。用定量針頭吸取同等量的被檢的雞胚絨尿液加入第1孔，依次做倍量稀釋，至最后一個(gè)倍量孔，棄去余液。用定量針頭每孔加入0. 025毫升1%雞紅細(xì)胞懸液，并設(shè)用生理鹽水代替被檢病毒液的紅細(xì)胞對(duì)照，立即在微量振蕩器上混勻，置室溫中30分鐘左右判定結(jié)果。判定方法與試管法相同。④微量血凝抑制試驗(yàn)。在微量凝集板上，兩排均從1-12孔或根據(jù)抗血清效價(jià)所需的孔數(shù)，用定量針頭在每孔加入0. 025毫升生理鹽水。往第1孔中分別加入已知抗鵝副黏病毒血清0. 025毫升，依次做倍量稀釋至最后1孔，棄去余液。第一排每孔加入含有4個(gè)凝集單位0. 025毫升被檢雞胚病毒液。第二排每孔加入含有4個(gè)凝集單位0. 025毫升已知鵝副黏病毒液。微量板在微量振蕩器上混勻，置室溫中30分鐘后用定量針頭每孔加入0. 025毫升1%雞紅細(xì)胞懸液，并設(shè)病毒液和雞紅細(xì)胞對(duì)照孔，在微量振蕩器上混勻，置室溫中30分鐘左右判定結(jié)果。判定方法與試管法相同。
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提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)
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實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)
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