從本質(zhì)上說，藥物都是化學(xué)物質(zhì)，其檢測方法均為臨床化學(xué)的常用技術(shù)。但體液中的藥物大多以μg/ml或ng/ml水平存在，并且其檢測不僅受同時存在的多種結(jié)構(gòu)相似的內(nèi)源性物質(zhì)干擾，還受和原型藥僅有微小差別的代謝物干擾。而某些藥物的TDM除原型藥外，還需同時檢測具藥理活性的代謝物。另一方面，藥物的有效濃度范圍和中毒水平，是結(jié)合大量臨床觀察確定的，要求任何實驗室建立的測定方法應(yīng)具有高度可比性。下面將僅結(jié)合藥物測定的特殊要求，對常用臨床化學(xué)技術(shù)作一評估性介紹。
（一)光譜法
多數(shù)藥物或代謝物本身在紫外光區(qū)即存在吸收峰，一些藥物或代謝物受激發(fā)后，本身即可發(fā)射熒光；而另外一些藥物還可通過特異的顯色反應(yīng)用分光法檢測。但無論可見光分光光度法、紫外光度法還是熒光光度法，用于體液中藥物檢測時，都存在靈敏度低、特異性差的缺點，特別是易受代謝物干擾。雖然采用提取、雙波長、示差、導(dǎo)數(shù)分光光度法等試圖提高其靈敏度和特異性，仍未能從根本上克服上述缺點。但光譜法操作簡便，所需儀器一般臨床實驗室都具備，檢測成本低，便于推廣。對治療血藥濃度水平較高，經(jīng)適當(dāng)方法改良光譜法能滿足臨床需要的藥物，現(xiàn)階段仍不失為一可采用的方法，如阿司匹林、對乙酰氨基酚、氨茶堿、苯妥英鈉、苯巴比妥鈉等。
火焰發(fā)射光譜法和原子吸收光譜法特異性及靈敏度均高，操作也較簡便，但僅能用于某些含體內(nèi)僅微量存在的金屬離子藥物。在TDM中可供鋰鹽、鉑鹽檢測用。
（二)色譜法
又稱層析法。系通過層析作用，使樣品中理化性質(zhì)不同的組分得以分離，若再配以適當(dāng)?shù)臋z測器，則可同時完成定性、定量工作。特異性高，可同時檢測同一樣本中的不同組分，是色譜法的共同優(yōu)點，這在TDM中尤有意義。薄層色譜法（TLC)雖然不斷改進(jìn)定量點樣技術(shù)并使用掃描定量，但其靈敏度及重復(fù)性仍低于其他色譜法，除用于毒物的檢測外，在TDM工作中較少應(yīng)用。
自60年代末期相繼發(fā)展成熟的氣相色譜法（GC)和高效液相色譜法（HPLC)，由于實現(xiàn)了高效層析分離和檢測聯(lián)機(jī)，可用微電腦控制層析條件、程序和數(shù)據(jù)處理，其特異性、靈敏度和重復(fù)性均好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物檢測。若采用內(nèi)標(biāo)本法定量，還可排除部分操作誤差，提高檢測結(jié)果的可靠性。HPLC和GC相比，由于不需對樣品高溫氣化，一般都可不進(jìn)行衍生化處理；另一方面，HPLC的固定相種類較多，流動相通過改變其組成成分及比例更是千變?nèi)f化。二者適當(dāng)組合，可對絕大多數(shù)有機(jī)化合物藥進(jìn)行分離測定。事實上，正是GC和HPLC這類先進(jìn)可靠的檢測方法的應(yīng)用，促進(jìn)了TDM的形成和發(fā)展。特別是HPLC已成為TDM的重要檢測技術(shù)，并常用作評估其他方法的參考方法。當(dāng)然，GC和HPLC一般www.med126.com均要求對樣品進(jìn)行預(yù)處理，兩法所用儀器都昂貴尚難普及。但從發(fā)展的觀點看，HPLC仍將成為國內(nèi)TDM的主要分析方法。近年來發(fā)展的GC-質(zhì)譜、HPLC-質(zhì)譜聯(lián)機(jī)檢測，更使這類分析手段的性能極大提高。
（三)免疫化學(xué)法
不少藥物都是半抗原或抗原，所以可引起過敏反應(yīng)。若能制備這些藥物相應(yīng)的特異性抗體，即可根據(jù)抗原-抗體反應(yīng)的特異性，應(yīng)用免疫化學(xué)法檢測這些藥物。TDM應(yīng)用的免疫化學(xué)法一般都采用競爭性免疫分析，即通過定量加入的少量特異性抗體，與標(biāo)本中相應(yīng)的抗原或半抗原性藥物及定量加入的標(biāo)記藥物間，產(chǎn)生競爭性結(jié)合，檢測標(biāo)記藥物與抗體結(jié)合的抑制程度，和同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)管比較，便可對樣本中的藥物定量。免疫化學(xué)法靈敏度極高，大多可達(dá)ng甚至pg檢測水平，可滿足所有藥物TDM的要求；該法所需標(biāo)本量少，一般均不需預(yù)處理，操作簡便，并可制成商品化試劑盒；還可利用一般生化、熒光自動分析儀進(jìn)行自動化操作。這些都是免疫化學(xué)法的優(yōu)點。
但在TDM中免疫法存在的主要問題是，特異性易受干擾。干擾因素除來自內(nèi)源性物質(zhì)外，特殊的是抗原性決定基團(tuán)未發(fā)生變化的待測藥物的代謝，或具相同相似抗原性的其他藥物及代謝物。如強(qiáng)心藥地高辛、洋地黃毒甙、地高辛代謝物二氫地高辛，均可與地高辛抗體結(jié)合。顯然，在體內(nèi)幾乎不發(fā)生代謝轉(zhuǎn)化而原型排泄的藥物，則較少代謝物干擾，尤其適用于免疫法檢測，如慶大霉素等氨基甙類抗生素。當(dāng)然，只有具備完全或半抗原性的藥物，并要能制備特異性抗體，才能用免疫化學(xué)法進(jìn)行TDM。但總的來說，由于免疫化學(xué)法的前述優(yōu)點，仍是TDM檢測技術(shù)發(fā)展的主要方向。
免疫化學(xué)法根據(jù)標(biāo)記物性質(zhì)不同，可分做放射免疫法、熒光免疫法和酶免疫法三類。根據(jù)測定中是否要分離與抗體結(jié)合和未結(jié)合的標(biāo)記物，又可分為多相（需分離)和均相（不分離)免疫分析法兩種。放射免疫法雖存在放射性污染，又是多相體系，分離結(jié)合和未結(jié)合標(biāo)記物操作繁雜，影響因素多，而分離效果又直接影響測定結(jié)果，但其靈敏度高，標(biāo)記技術(shù)相對成熟，國內(nèi)生產(chǎn)的TDM試劑盒多為此類。熒光免疫法按反應(yīng)體系及定量方法不同，還可進(jìn)一步分做若干種。與放射免疫法相比，熒光免疫法無放射性污染，并且大多操作簡便，便于推廣。國外生產(chǎn)的TDM用試劑盒，有相當(dāng)一部分即屬于此類，并且還有專供TDM熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生產(chǎn)。酶免疫分析法是目前國外TDM免疫分析中最常采用的方法，特別是均相酶免疫分析法。本法除具有熒光免疫法的優(yōu)點外，通過選用合適的標(biāo)記酶，在目前已較廣泛普及的多種自動化分析儀即可實現(xiàn)自動化操作，更利于推廣。特別是近年來，在TDM的酶免疫分析中，應(yīng)用酶偶聯(lián)反應(yīng)原理，以輔酶黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD)標(biāo)記藥物，將葡萄糖氧化酶蛋白、偶聯(lián)輔助酶－過氧化物酶及底物和顯色劑4-氯-1-萘酚固化在薄膜上，制成類似pH試紙樣的試條。測定時，只要滴上微量樣品，根據(jù)成色深淺，即可作出藥物濃度的粗略判別。這一方法使病人自我或臨床醫(yī)師病床旁方便快速進(jìn)行TDM工作成為可能。目前國外已有供茶堿和bhskgw.cn苯妥英鈉測定用的這種試條問市。無疑這一方法的推廣，將有助于促進(jìn)TDM的普及，具有良好的發(fā)展前景。
（四)其他檢測方法
抑菌試驗曾用于測定體液中的抗菌藥物濃度。該方法簡便易行，可利用臨床細(xì)菌室即可開展。但其特異性、靈敏度、重復(fù)性均差，定量粗糙，并易受同時使用的其他抗菌藥物的干擾，在TDM中已較少使用。一些本身即為內(nèi)源性物質(zhì)的藥物，如鉀、鈉、鈣、激素藥等，在臨床檢驗中已有成熟的檢測方法，則可借用。
必須指出，多數(shù)需進(jìn)行TDM的藥物，都有不只一種方法可供選用。應(yīng)根據(jù)測定藥物的有效血藥濃度水平所決定的靈敏度要求，是否需同時檢測多種藥物或活性代謝物，可供選用的儀器設(shè)備及檢測經(jīng)濟(jì)成本等，綜合考慮，確定一能滿足臨床要求的可行方法。
