B細(xì)胞具有多種特異性抗原和受體,據(jù)此建立了相應(yīng)的檢測(cè)方法,一般用以研究B細(xì)胞各分化發(fā)育階段的特性,也可藉以鑒定和計(jì)數(shù)各階段B細(xì)胞在人外周血和淋巴樣組織的分布以及疾病時(shí)的變化動(dòng)態(tài),為臨床提供診治相關(guān)疾病的有用信息。
一、B細(xì)胞表面抗原的檢測(cè)
B細(xì)胞表面有CD19、CD20、CD21、CD22和CD29等分化抗原,其中有些系全部B細(xì)胞所共有,而有些僅活化B細(xì)胞所特有,據(jù)此可用相應(yīng)的CD系列單克隆抗體,通bhskgw.cn/Article/過間接熒光免疫法、酶免疫組化或Abhskgw.cn/yaoshi/BC法加以檢測(cè)。健康成年人外周血CD20陽性細(xì)胞約占淋巴細(xì)胞總數(shù)的8%~12%。
二、B細(xì)胞受體的檢測(cè)
B細(xì)胞表面有膜免疫球蛋白(SmIg)、Fc受體、補(bǔ)體受體、EB病毒受體和小鼠紅細(xì)胞受體,其中以SmIg為B細(xì)胞所特有,是鑒定B細(xì)胞可靠的指標(biāo)。
(一)SmIg的檢測(cè)
大多采用間接熒光免疫法或包括ABC法在內(nèi)的酶免疫組化法,關(guān)鍵是選用高效價(jià)、高特異性和高和力的熒光或酶標(biāo)記的多價(jià)抗人Ig抗體,也可分別用各種類型的Ig,即IgM、IgG、IgA、IgE等抗血清,檢測(cè)帶有各種類型Ig的B細(xì)胞,在人外周血中以帶有SmIgM的細(xì)胞數(shù)為最多。
B細(xì)胞經(jīng)熒光標(biāo)記的抗Ig抗體染色,細(xì)胞膜表面呈現(xiàn)的熒光著色可有不同的形式,開始均勻分布呈環(huán)狀,其后集中在某些部位呈斑點(diǎn)狀,然后又可集在一個(gè)部位呈帽狀,最后可被吞飲入胞漿直至熒光消失。這一現(xiàn)象是由于淋巴細(xì)胞膜由雙層類脂組成,上嵌有蛋白分子,在體溫條件下,膜呈半液體狀,而鑲嵌物能在其中移動(dòng)。當(dāng)SmIg抗體發(fā)生結(jié)合時(shí),由于抗血清為雙價(jià),使SmIg出現(xiàn)交聯(lián)現(xiàn)象,這種抗原與抗體結(jié)合物可連成斑點(diǎn)和帽狀,時(shí)間過長,帽狀結(jié)合物可脫落或被吞飲而消失,因此染色后,觀察時(shí)間不能超過30min,或在染色時(shí)加疊氮鈉防止帽狀物形成或被吞飲。
(二)Fc受體和補(bǔ)體受體的檢測(cè)
B細(xì)胞表面具有與IgGFc段結(jié)合的受體,極易與抗原抗體復(fù)合物中抗體Fc段牢固結(jié)合,故用相應(yīng)抗體致敏的紅細(xì)胞(EA)作批示物,在一定條件下,它能與帶Fc受體的B細(xì)胞形成EA花環(huán),故稱EA花環(huán)試驗(yàn)。而細(xì)胞表面的補(bǔ)體受體,則能與紅細(xì)胞(E)-抗紅細(xì)胞抗體(A)-補(bǔ)體(C)復(fù)合物(EAC)中的補(bǔ)體相結(jié)合,從而建立EAC花環(huán)試驗(yàn)。但由于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK以及部分T細(xì)胞也帶有Fc或補(bǔ)體受體。因此形成EA和EAC花環(huán)并非B細(xì)胞所特有,加上該類試驗(yàn)需制備新鮮指示物,操作麻煩,目前基本上已被其他試驗(yàn)所取代,甚少應(yīng)用。
(三)小鼠紅細(xì)胞受體的檢測(cè)
部分B細(xì)胞能與小鼠紅細(xì)胞形成花環(huán),慢性B細(xì)胞白血病患者外周血淋巴形成小鼠紅細(xì)胞花環(huán)率高達(dá)60%~85%,但健康人該花環(huán)率僅占總淋巴細(xì)胞的5%~10%,據(jù)此推知形成該花環(huán)的性能是某些B細(xì)胞亞群的標(biāo)志,由于方法簡(jiǎn)便,臨床可用作鑒定不同型淋巴細(xì)胞白血病。