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實用免疫細(xì)胞與核酸:前言

免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry)又稱免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry)是組織化學(xué)的分支,它是用標(biāo)記的特異性抗體(或抗原)對組織內(nèi)抗原(或抗體)的分布進(jìn)行細(xì)胞和組織原位的檢測技術(shù)。Coons及其同事們于1941年首次用熒光素標(biāo)記抗體檢測肺組織內(nèi)肺炎雙球菌獲得成功,開…

免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry)又稱免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry)是組織化學(xué)的分支,它是用標(biāo)記的特異性抗體(或抗原)對組織內(nèi)抗原(或抗體)的分布進(jìn)行細(xì)胞和組織原位的檢測技術(shù)。Coons及其同事們于1941年首次用熒光素標(biāo)記抗體檢測肺組織內(nèi)肺炎雙球菌獲得成功,開創(chuàng)了細(xì)胞化學(xué)中“免疫細(xì)胞化學(xué)”這一新篇章 。免疫細(xì)胞化學(xué)的迅猛發(fā)展是在近10余年。繼Nakan建立的酶標(biāo)記抗體技術(shù)后, Sternberger在此基礎(chǔ)上改良并建立了辣根過氧化物酶-抗過氧化物酶(PAP)技術(shù),使免疫細(xì)胞化學(xué)得到日益廣泛的應(yīng)用。80年代,Hsu等建立了抗生物素-生物素(ABC)法之后,免疫金-銀染色法、半抗原標(biāo)記法、免疫電鏡技術(shù)等相繼問世,使免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)成為當(dāng)今生物醫(yī)學(xué)中形態(tài)、功能、代謝綜合研究的一項有力工具,近年來,隨著抗原的提純和抗體標(biāo)記技術(shù)的改進(jìn),特別是單克隆抗體技術(shù)的引入,使免疫細(xì)胞化學(xué)在生物基礎(chǔ)研究如病理學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和微生物、寄生蟲、病毒等病原體的診斷和研究中日益顯示出巨大的實用價值,并使實驗向臨床,向定量和分子水平深入。鑒于免疫細(xì)胞化學(xué)的發(fā)展極為迅速,我們在原編寫的“實用免疫細(xì)胞化學(xué)”一書的基礎(chǔ)上匯入了免疫細(xì)胞化學(xué)國內(nèi)外最新進(jìn)展并增bhskgw.cn編核酸分子雜交技術(shù)。希望本書能有益于我國bhskgw.cn/zhicheng/生命科學(xué)的研究,并能給讀者新的信息和啟示。

本書以理論與開發(fā)技術(shù)相結(jié)合,實用為主 ,盡力兼顧技術(shù)方法的先進(jìn)性和科學(xué)性,全書正文廿三章 及附錄1~4,計約84萬字,105幅插圖。第一章 為總論,簡述免疫細(xì)胞化學(xué)的發(fā)展概況、有關(guān)基礎(chǔ)理論和技術(shù)。第二章 敘述了抗原和抗體的制備。第三至八章 分別詳述了免疫熒光細(xì)胞化學(xué)、免疫酶細(xì)胞化學(xué)、免疫金、銀和鐵標(biāo)記細(xì)胞化學(xué)、親和免疫細(xì)胞化學(xué)。電子顯微鏡免疫細(xì)胞化學(xué)和蛋白質(zhì)及多肽激素的放射免疫測定步驟、原位投射自顯影技術(shù)等第十一至十七章 分別介紹免疫細(xì)胞化學(xué)在神經(jīng)科學(xué)、腫瘤病學(xué)、消化器官、皮膚病學(xué)、自身免疫性疾病和病原體的快速檢查方法及應(yīng)用。

近10多年來,相繼發(fā)現(xiàn)了多種親合物質(zhì),如植物凝集素(lectins)與糖結(jié)合物(glycol conju-gates)、葡萄球菌A蛋白(staphylococal protein A)與IgG、生物素( biotin)與卵白素(親合素)(A-vidin)、激素、脂質(zhì)與受體等。這些物質(zhì)是一些有多價結(jié)合能力的物質(zhì),不但親和物質(zhì)之間有高度親合力,而且可以與標(biāo)記物如熒光素、酶、同位素、鐵蛋白等相結(jié)合。Bayer(1976)將這種利用兩種物質(zhì)之間的高度親合力而相互結(jié)合的化學(xué)反應(yīng),進(jìn)行細(xì)胞化學(xué)檢測,稱為親合細(xì)胞化學(xué)(affinity cytochemistry)。它和免疫細(xì)胞化學(xué)的區(qū)別是親合物質(zhì)之間的結(jié)合不是抗原和抗體反應(yīng)。然而抗原和抗體反應(yīng)也是一種物質(zhì)間的親合反應(yīng),是一種特殊的親合細(xì)胞化學(xué)。由于引入親合細(xì)胞化學(xué),提高和增加了免疫細(xì)胞化學(xué)的敏感性和檢測范圍,是免疫細(xì)胞化學(xué)的新發(fā)展,本書第六章 予詳述。

原位分子雜交(In situ hybridization)技術(shù)引入免疫細(xì)胞化學(xué),是現(xiàn)代免疫細(xì)胞化學(xué)向基因水平深入發(fā)展的重要標(biāo)志。近年來,分子雜交與免疫細(xì)胞化學(xué)的結(jié)合日益緊密,尤其是在雜交后信號的檢測技術(shù)中,引入了免疫細(xì)胞化學(xué)的免疫放大和顯色技術(shù),已經(jīng)形成了雜交免疫細(xì)胞化學(xué)或稱原位雜交免疫細(xì)胞化學(xué)(In situ hybridizationimmunocytochemistry),成為免疫細(xì)胞化學(xué)中又一新的分支。分子雜交與免疫細(xì)胞化學(xué)的結(jié)合,形成了在細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子水平同時檢測基因及其表達(dá)產(chǎn)物的完整體系,把基因探針(基因工程)和單克隆抗體技術(shù)結(jié)合起來,成為當(dāng)代生物科學(xué)和醫(yī)學(xué)在分子水平研究和診斷的新興技術(shù)。尤其是近年來與PCR技術(shù)結(jié)合的原位PCR技術(shù)和原位免疫PCR技術(shù)敏感性很高。本書第十八至二十三章 對有關(guān)分子生物學(xué)基礎(chǔ)理論、核酸分子探針制備、原位分子雜交技術(shù)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、核酸分子雜交電鏡技術(shù)、雜交與免疫細(xì)胞化學(xué)雙標(biāo)記技術(shù)、分子雜交的FISH技術(shù)和PRINS技術(shù)及其在染色體制片的應(yīng)用和分子雜交基因診斷的應(yīng)用等方面,由有關(guān)專家分別作出了專章 敘述。

定量免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是這個領(lǐng)域發(fā)展很快的一個方面,由于流式細(xì)胞儀,激光共聚焦顯微儀和圖像分析儀在免疫細(xì)胞化學(xué)中的應(yīng)用,使免疫細(xì)胞化學(xué)的定量檢測成為可能,從而提高了免疫細(xì)胞化學(xué)的定量水平。本書第九和十章 作了詳細(xì)敘述。

本書附錄列有一些常用的試劑配制方法,以便實際應(yīng)用時參考。

由于本書編者都具有實際操作和應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)與核酸分子雜交技術(shù)的經(jīng)驗,對某些方法的操作技術(shù)多結(jié)合編者的經(jīng)驗和在國內(nèi)條件下應(yīng)用的體會加以敘述,實用性強(qiáng),能指導(dǎo)操作和啟發(fā)讀者如何應(yīng)用。本書既有基礎(chǔ)理論又有本領(lǐng)域國內(nèi)外最新進(jìn)展,對生物科學(xué),尤其對醫(yī)學(xué)科學(xué)工作者具有重要的參考價值,又可作為研究生、進(jìn)修生的教材。

本書編寫過程中,得到第三、四軍醫(yī)大學(xué)領(lǐng)導(dǎo)及廣大同行的鼓勵和支持;第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報編輯室及張吉強(qiáng)、孫榆等同志在協(xié)助本書的出版、校對和抄寫等方面做了大量的工作,在此深表感謝。

本書中難免有不當(dāng)多處,懇切希望讀者批評指正。

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