免疫細(xì)胞化學(xué)又稱免疫組織化學(xué)、其主要原理是用標(biāo)記的抗體(或抗原)對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)進(jìn)行定性、定位或定量檢測(cè),經(jīng)過(guò)組織化學(xué)的呈bhskgw.cn/yaoshi/色反應(yīng)之后,用顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡觀察。凡是能作抗原、半抗原的物質(zhì),如蛋白質(zhì)、多肽、核酸、酶、激素、磷脂、多糖、受體及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體的組織、細(xì)胞內(nèi)將其用免疫細(xì)胞化學(xué)手段檢出和研究。
免疫細(xì)胞化學(xué)的突出優(yōu)點(diǎn)是:
1.高度特異性 抗原抗體反應(yīng)是特異性最強(qiáng)的反應(yīng)之一,免疫細(xì)胞化學(xué)所用的抗體必須是特異性強(qiáng)的多價(jià)或單價(jià)抗體,具有高度的識(shí)別能力,在抗原識(shí)別上可達(dá)到單個(gè)氨基酸的水平,這是其它組織化學(xué)難以相比的。
2.敏感性高 現(xiàn)代免疫細(xì)胞化學(xué)采用各種有效方法最大限度保存細(xì)胞和組織內(nèi)待檢物質(zhì)的抗原性,或采用各種增敏方法,使用高度敏感的和高親和力的抗體,保證可檢出細(xì)胞內(nèi)超微量的抗原成分,用顯微鏡或電子顯微鏡觀察結(jié)果,因此,它是在細(xì)胞、分子水平或基因水平的檢測(cè)技術(shù)。
3.方法步驟統(tǒng)一 若掌握一種技術(shù)操作方法步驟,則一通百通。
4.形態(tài)、機(jī)能和代謝密切結(jié)合 是一種綜合定性、定位和定量密切結(jié)合;形態(tài)、機(jī)能和代謝密切結(jié)合為一體的研究和檢測(cè)技術(shù)。
免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在細(xì)胞、染色體或亞細(xì)胞水平原位檢測(cè)抗原分子,是其它任何生物技術(shù)難以達(dá)到和代替的,它以在細(xì)胞、基因和分子水平同時(shí)原位顯示基因及其表達(dá)產(chǎn)物,形成了新的檢測(cè)系統(tǒng),為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和各個(gè)領(lǐng)域分子水平的研究與診斷,開拓了廣闊的前景。
免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)日新月異,以驚人的速度發(fā)展。尤其是和分子生物學(xué)的理論和技術(shù)日益結(jié)合密切,基因探針、核酸分子雜交技術(shù)、原位PCR技術(shù)、核酸雜交和免疫細(xì)胞化學(xué)雙標(biāo)記技術(shù)、電鏡雜交技術(shù)等成為免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的新發(fā)展成員,標(biāo)志著免疫細(xì)胞化學(xué)又進(jìn)入一個(gè)新的發(fā)展階段。核酸分子探針-雜交-免疫細(xì)胞化學(xué)放大和顯示雜交信號(hào),可以稱為雜交免疫細(xì)胞化學(xué)。所以,核酸分子探針的研制已成為免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中必需的試劑生產(chǎn)技術(shù),需要學(xué)習(xí)引進(jìn)分子生物學(xué)的有關(guān)技術(shù)和設(shè)備,建立相應(yīng)的基因工程實(shí)驗(yàn)條件,把基因重組技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)融合在一起,就形成了現(xiàn)代免疫細(xì)胞化學(xué)的新主體。更高倍電鏡技術(shù)和圖像分析,流式細(xì)胞儀技術(shù)和激光共聚焦顯微技術(shù)和不斷更新,把原位定性、定位和定量技術(shù)提高到了更新的水平,形成了免疫細(xì)胞化學(xué)發(fā)展的兩翼,向著生命科學(xué)更廣闊領(lǐng)域飛翔。
免疫細(xì)胞化學(xué)的全過(guò)程包括:①抗原提取和純化;②免疫動(dòng)物或細(xì)胞融合(單克隆抗體);③抗體效價(jià)檢測(cè)和提;④標(biāo)記抗體;⑤細(xì)胞和組織切片標(biāo)志的制備;⑥免疫細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)和顯色;⑦觀察和記錄結(jié)果。
由此可見,免疫細(xì)化學(xué)的基本理論是抗原抗體反應(yīng),標(biāo)記化學(xué)反應(yīng)和呈色化學(xué)反應(yīng)。由于免疫細(xì)胞化學(xué)和原位核酸分子雜交是在細(xì)胞和組織上進(jìn)行抗原抗體反應(yīng),所以,必須熟練掌握顯微標(biāo)本制備的全過(guò)程,要求待檢標(biāo)本形態(tài)結(jié)構(gòu)和抗原性保存良好,抗原不從原位擴(kuò)散或丟失。所以從事免疫細(xì)胞化學(xué)的工作者必須了解以下有關(guān)理論及掌握有關(guān)細(xì)胞和組織學(xué)技術(shù)。