1 試劑
1.1 2mol /L 鹽酸羥胺，冷處保存。
1.23.5mol /L 氫氧化鈉。
1.3 4mol /L 鹽酸
濃鹽酸（比重1.18)1份，加2份蒸餾水稀釋。
1.40.37mol /L 三氯化鐵（FeCl3·6H2O)，溶解于0.1mol /bhskgw.cn/kuaiji/L 鹽酸內(nèi)。
1.50.001mol /L 醋酸鈉（pH4.5)。
1.62.5mmol /L 的氯化乙酰膽堿液
精確稱取已干燥至恒重的氯化乙酰膽堿22.7mg，用0.001mol /L 醋酸鈉液（pH4.5)溶解，移入50ml容量瓶中，用0.001mol /L 醋酸鈉液稀釋至刻度。
2 操作
2.1 樣品
精確量取樣品1ml（含O-乙�；�0.5～2.5μmol)置于試管中，加2ml新鮮配制的堿性羥胺液（等體積的2mol /L 鹽酸羥胺與3.5mol /L 氫氫化鈉混合，3小時(shí)內(nèi)可用)，搖勻，于室溫放置4分鐘，加1ml 4mol /L 鹽酸，使pH為1.2±0.2，搖勻，加1ml 0.bhskgw.cn/shiti/37mol /L 三氯化鐵，搖勻，于540nm比色，同時(shí)作一樣品空白，取樣品1ml于試管中，先加1ml 4mol /L 鹽酸，后加2ml堿性羥胺（即加酸與加堿性羥胺的次序顛倒)，加三氯化鐵等操作同上。
2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線
精確量取氯化乙酰膽堿（或溴化乙酰膽堿)標(biāo)準(zhǔn)液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置于試管中，加蒸餾水補(bǔ)至1ml，其余操作同樣品，同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)空白，即作與上相同的系列標(biāo)準(zhǔn)管，只是加酸與加堿性羥胺的次序顛倒，其他操作均同。
3 計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)管比色讀數(shù)分別減去各自空白比色讀數(shù)，然后畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品比色讀數(shù)減去其空白讀數(shù)，再?gòu)臉?biāo)準(zhǔn)曲線查出品相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)液之ml數(shù)A。
樣品O-乙酰基含量（mmol /L)=A×2.5
附注
也可采用WHO規(guī)程法，但應(yīng)相應(yīng)提高樣品用量。
