生物制品不得含有雜菌（有專門規(guī)定者除外)，滅活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、本毒。在制造過程中應(yīng)由制造部門按各制品制造及檢定規(guī)程規(guī)定進(jìn)行無菌試驗(yàn)，分裝后的制品須經(jīng)質(zhì)量檢定部門做最后檢定。各種生物制品的無菌試驗(yàn)除有專門規(guī)定者外，均應(yīng)按照本規(guī)程的規(guī)定進(jìn)行。
1 抽樣
1.1原液及半成品
原液及半成品應(yīng)每瓶分別進(jìn)行無菌試驗(yàn)，其抽樣量應(yīng)至少為0.1%，但不得少于1.0ml。
1.1.1 大罐稀釋的制品抽樣數(shù)量不得少于10ml。
1.1.2 原液及半成品每開瓶一次，應(yīng)如上法抽驗(yàn)。
1.2 成品
每亞批均應(yīng)進(jìn)行無菌試驗(yàn)，樣品應(yīng)隨機(jī)抽取，應(yīng)具有代表性（包括分裝過程的前、中、后樣品)。
1.2.1分裝量在100支（瓶)或以下者抽檢不少于5支，101～500支（瓶)者抽檢不少于10支（瓶)，501～10000支（瓶)者抽檢不少于20支（瓶，10001支（瓶)以上者抽檢40支（瓶)。
1.2.2每瓶裝量20ml以上的凍干血液制品，每柜凍干200瓶以下者抽檢2瓶，200瓶及以上者抽檢4瓶。6～20ml抽檢量加倍。5ml和5ml以下者按1.2.1項(xiàng)抽檢。
1.3凡規(guī)定需作支原體檢查的制品，均應(yīng)在半成品時(shí)按亞批進(jìn)行檢查，成品可不再做。
2 無菌試驗(yàn)用培養(yǎng)基（培養(yǎng)基處方可附錄1)
2.1 檢查制品中本菌是否存活應(yīng)采用適于本菌發(fā)育生長(zhǎng)的培養(yǎng)基（在半成品時(shí)檢查，有專門規(guī)定者除外)。
2.2 檢查需氧性和厭氧性雜菌應(yīng)采用硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基。檢查不含汞類防腐劑制品中的需氧性和厭氧性雜菌時(shí)，該培養(yǎng)基中可不加硫乙醇酸鹽。
檢查霉菌和腐生菌應(yīng)采用改良馬丁培養(yǎng)基。
檢查混濁制品可采用不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基。檢查活菌苗時(shí)可加大瓊脂含量，做成斜面。
2.3 檢查支原體應(yīng)采用豬胃消化液半固體或牛心消化液半固體培養(yǎng)基。
2.4 生物制品無菌試驗(yàn)用培養(yǎng)基亦可用經(jīng)檢定合格的干燥培養(yǎng)基配制。
2.5 無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度，乙型溶血性鏈球菌（32210株)應(yīng)達(dá)到10-8，短芽胞桿菌（7316株)和生孢子梭狀芽胞桿菌（64941株)應(yīng)達(dá)到10-7，白色念珠菌（ATCc 10231)和臘葉芽枝霉應(yīng)達(dá)到10-6。
2.6 生物制品無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基由質(zhì)量檢定部門與培養(yǎng)基制造部門會(huì)同進(jìn)行靈敏度試驗(yàn)。每當(dāng)更換主要原材料時(shí)，應(yīng)進(jìn)行靈敏度試驗(yàn)，合格后方可應(yīng)用（靈敏度試驗(yàn)法見附錄2、3)。
2.7 各生產(chǎn)單位的質(zhì)量檢定部門應(yīng)定期抽檢無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度，檢定所應(yīng)定期抽檢各所的無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基。
3 無菌試驗(yàn)方法
3.1 無菌試驗(yàn)取樣、移種等全部操作，應(yīng)在無菌操作室內(nèi)或無菌條件下進(jìn)行，無菌操作室應(yīng)經(jīng)常保持清潔，在每次操作前，應(yīng)徹底消毒。
3.2 菌苗、疫苗、類毒素、抗毒素類制品及粘稠不易過濾的血液制品應(yīng)用直接接種法進(jìn)行無菌試驗(yàn)。人白蛋白及人丙種球蛋白（包括各種劑型及應(yīng)用途徑的制品)應(yīng)用薄膜過濾法進(jìn)行無菌試驗(yàn)，其他血液制品亦可用薄膜過濾法或直接接種法進(jìn)行。
3.3 直接接種法
3.3.1 菌苗、疫苗、類毒素、抗毒素類制品
3.3.1.1 每安瓿裝量5.0ml以上者（不含5bhskgw.cn/sanji/.0ml)取樣不應(yīng)少于1.0ml，裝量在5.0ml以下者（含5.0ml)取樣不得少于0.5ml，裝量不足0.5ml者，全部吸取。
3.3.1.2 含防腐劑的制品，接種量與培養(yǎng)基的比例：用苯酚或氯仿作防腐劑者至少為1:20，用汞作防腐劑者或制品內(nèi)含有甲醛、抗生素者至少為1:50。先按此比例接種于硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基內(nèi)增菌，于20～25℃培育3～4天后移種至硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、適宜的瓊脂斜面、改良馬丁培養(yǎng)基各2管，每管0.5ml。將硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、適宜的瓊脂斜面各1管置30～35℃培育，其余各管置20～25℃培育，培育時(shí)間除有專門規(guī)定者外共為8天。
3.3.1.3 不含防腐劑制品，裝量在5.0ml以下者（包括5.0ml)每10支安瓿混合，裝量在5.0ml以上者每7支安瓿混合，將混合后的樣品直接接種一組培養(yǎng)基，分別置20～25℃、30～35℃培育，培育時(shí)間共為8天。
3.3.1.4 支原體培養(yǎng)基臨用時(shí)將半固體煮沸10～15分鐘后，冷卻到56℃左右，加入未滅能馬血清或滅能小牛血清和酵母浸液（培養(yǎng)基、血清、酵母浸液之比為7:2:1)，并可酌情加入適量青霉素或醋酸鉈，充分搖勻，等冷至35～37℃時(shí)種入待檢樣品0.5～1.0ml，共接種2支培養(yǎng)基，置35～37℃培育14天。
3.3.1.5 混濁和接種后不能判定結(jié)果的制品，可取規(guī)定量的樣品接種于不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（200ml)內(nèi)進(jìn)行增菌培養(yǎng)，3～4天后移種。培養(yǎng)基種類和支數(shù)、培育溫度同3.3.1.2bhskgw.cn/rencai/項(xiàng)，共培育8天后判定結(jié)果。
3.3.2 血液制品
3.3.2.1 取規(guī)定抽樣數(shù)，按下列規(guī)定，從每瓶抽取樣品，并全部接種完。
樣品每瓶裝量不足1.0ml者，抽取全量，1～20ml以下者（不含20ml)，抽取1.0ml以上，每支裝量為15ml的培養(yǎng)基，接種1.0ml。
樣品每瓶裝量以下者（不含)抽取5.0ml以上,100ml及以上者按15%抽樣，每支裝量為40ml的培養(yǎng)基，接種5.0ml。
應(yīng)接種的培養(yǎng)基支數(shù)依取樣的總量而定。接種硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基與改良馬丁培養(yǎng)基支數(shù)之比為2:1。
接種后將硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基總支數(shù)的1/2置30～35℃培育，其余置20～25℃培育，改良馬丁培養(yǎng)基置20～25℃培育，培育時(shí)間不少于14天。
3.4 薄膜過濾法
濾膜孔徑為0.22～0.3μm。
取規(guī)定抽檢樣品數(shù)，每瓶裝量100ml及100ml以下者取全量，100ml以上者取半量加入滅菌薄膜過濾器內(nèi)，加壓或減壓過濾。如為含汞防腐劑者，在樣品過濾后，應(yīng)用滅菌生理鹽水或其他適宜溶劑沖洗濾膜3次，每次100ml。過濾后，無菌取出濾膜，分別放入硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基2支及改良馬丁培養(yǎng)基1支（每支裝量不少于40ml，高度不得低于7cm)。如果使用一個(gè)過濾裝置，則將該膜剪成三等分，分別放入規(guī)定培養(yǎng)基中。將濾膜放入培養(yǎng)基后，一支硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基置30～35℃培育，其余各支培養(yǎng)基置20～25℃培育。培育時(shí)間不少于7天。
最好采用全封閉式一次性微孔過濾集菌器，要求每支培養(yǎng)器培養(yǎng)裝量為100ml。
3.5 檢查厭氧性雜菌用培養(yǎng)基需加熱驅(qū)氧者，必須冷卻到45℃以下再行接種。
3.6 凍干制品按使用說明書或瓶簽規(guī)定的稀釋量稀釋后進(jìn)行無菌試驗(yàn)。
4 判定
4.1 無雜菌生長(zhǎng)判為合格（有專門規(guī)定者除外)。
4.2 無菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)雜菌生長(zhǎng)，可復(fù)試。該制品量應(yīng)加倍。若復(fù)試仍有同樣雜菌生長(zhǎng)，該制品判為不合格。如為不同雜菌生長(zhǎng)，可第二次復(fù)試，復(fù)試樣品為第一次復(fù)試量的2倍，若仍有雜菌生長(zhǎng)該制品判為不合格。支原體陽性者不復(fù)試，該批制品判為不合格。
4.3 成品無菌試驗(yàn)不合格的亞批數(shù)占整批的30%以上時(shí)，由質(zhì)量檢定部門會(huì)同有關(guān)部門根據(jù)具體情況，全部或部分廢棄。
