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1.1 材料
1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠20只,清潔級(jí),雄性,體重(150±30)g,由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
1.1.2 主要儀器
RQH350 型人工氣候箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司); JXDT1型小鼠跳臺(tái)儀;BS110型電子天平(北京賽多科斯天平有限公司)，低溫超速離心機(jī)(美國(guó)Beckman公司產(chǎn)品)。
1.1.3 主要試劑
大鼠血清ACTH、CORT放射免疫試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所)，IL1β、IL6、TNFα酶聯(lián)免疫試劑盒(美國(guó)R&D公司)，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/P>
1.2 方法
1.2.1 動(dòng)物分組和處理
健康雄性Wistar大鼠共20只,體重(150±30) g,每籠5只, 普通環(huán)境，自然光照，自由進(jìn)食水。實(shí)驗(yàn)前對(duì)每只動(dòng)物進(jìn)行一般狀態(tài)的觀察并記錄,舌象每天拍照1 次。穩(wěn)定飼養(yǎng)3 d后隨機(jī)分為正常對(duì)照組(10只)和模型組(10只),正常對(duì)照組正常飼養(yǎng)(每籠普通鼠飼料250 g/d、滅菌食用水500 ml/d,隨機(jī)飲食水)，未受任何刺激,室溫下喂養(yǎng), 溫度(25±3) ℃,相對(duì)濕度60%～80%。
1.2.2 異常黑膽質(zhì)證載體大鼠模型的制作
1.2.2.1 干寒飼養(yǎng)環(huán)境
按照文獻(xiàn)[34]和維吾爾醫(yī)學(xué)異常體液與環(huán)境的關(guān)系,將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于適宜的喂養(yǎng)環(huán)境。采用人工氣候箱模擬干寒環(huán)境,溫度(6±1)℃,相對(duì)濕度25%～32.8%,每日11∶00 AM～9∶00 PM將模型組動(dòng)物置于人工氣候箱中。正常對(duì)照組與模型組均從6∶00 AM～6∶00 PM 提供光線(xiàn)。
1.2.2.2 干寒屬性的飼料在普通鼠飼料中按每公斤7∶3的比例加入相等比例的芫荽子和大麥,然后制成顆粒狀干飼料,委托新疆維吾爾自治區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工。喂養(yǎng)方法根據(jù)文獻(xiàn)[5]并適當(dāng)改進(jìn),每籠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提供飼料250 g/d、滅菌食用水500 ml/d。
1.2.2.3 慢性間斷足底電刺激按照文獻(xiàn)[69]并略加改進(jìn),采用間斷足底電刺激(第1周每次30 min、電壓35 V、1次/d;第2周每次35 min、電壓40 V、1次/d;第3周每次45 min、電壓45 V、1次/d)，產(chǎn)生慢性應(yīng)激。
1.2.2.4 制動(dòng)將大鼠放入大鼠固定器中，水平置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)，保證大鼠不受壓，以不能回轉(zhuǎn)為度，但其運(yùn)動(dòng)受制動(dòng)。
1.2.2.5 強(qiáng)迫游泳大鼠每日置于水溫(25±1)℃的水中強(qiáng)迫游泳5 min, 待毛發(fā)變干后放回飼養(yǎng)室醫(yī).學(xué).全.在.線(xiàn)bhskgw.cn。
1.3 觀察指標(biāo)
1.3.1 一般狀態(tài)建模前后動(dòng)物的舌苔、體形、皮膚毛發(fā)、行為狀態(tài)、情緒反應(yīng)、興奮程度、睡眠狀態(tài)、體重、飲食量和飲水量的變化。
1.3.2 定量指標(biāo)(1)體重: 每天施加刺激因素后，正常對(duì)照組和模型組禁食4 h，然后稱(chēng)量每只大鼠體重并記錄。(2)飲食量:每日2∶00 PM 加飼料250 g,次日10∶00 AM 稱(chēng)飼料余量(總飲食量),根據(jù)下述公式計(jì)算每100 g體重相對(duì)應(yīng)的飲食量并記錄：每100 g體重的飲食量= (100 g×總飲食量)/總體重。(3)飲水量:每日2∶00 PM給水500 ml,次日10∶00 AM稱(chēng)剩余水量(總飲水量),根據(jù)下述公式計(jì)算每100 g體重相對(duì)應(yīng)的飲水量并記錄：每100 g體重的飲水量= (100 g×總飲水量)/總體重。(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，在麻醉狀態(tài)下取血，頸椎脫臼處死所有動(dòng)物，4 ℃離心分離血清，分別采用大鼠ACTH、CORT放射免疫試劑盒，IL1β、IL6、 TNFα酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)[10-11]。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0軟件處理, 飲食量、飲水量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)進(jìn)行差異分析，體重按重復(fù)測(cè)量資料的方差分析法進(jìn)行差異分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α = 0.05。
2 結(jié)果
2.1 一般狀態(tài)的變化與正常對(duì)照組相比，模型組動(dòng)物的體形明顯偏瘦，毛發(fā)手感粗糙，觀之無(wú)光澤、易掉，性情急躁易激惹，爭(zhēng)食爭(zhēng)水現(xiàn)象明顯，行動(dòng)較遲緩，易倦怠，睡眠淺且易醒，皮溫較低，大便干燥，體重增長(zhǎng)速度緩慢,飲食量、飲水量增多,舌暗紫有瘀斑(圖1)。
2.2 2組體重的變化造模前，模型組與正常對(duì)照組大鼠體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。從造模第11天至第21天，模型組大鼠體重明顯低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表1)。表1造模前和造模期2組體重變化(略)
2.3 2組每100 g體重飲食量變化造模第3天，模型組與正常對(duì)照組大鼠飲食量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);從造模第7天開(kāi)始，模型組大鼠飲食量比正常對(duì)照組大鼠逐漸增多，到造模第21天，模型組大鼠飲食量與正常對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表2)。表2 造模期2組飲食量變化(略)
2.4 2組每100 g體重飲水量變化造模第3天，模型組與正常對(duì)照組大鼠飲水量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);從造模第7天開(kāi)始到造模第21天，模型組大鼠飲水量與正常對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表3)。表3造模期2組飲水量變化(略)
