方法名稱(chēng)： |
云南紅豆杉枝葉—紫杉醇和三尖杉寧堿的測(cè)定—HPLC-UV |
應(yīng)用范圍： |
用于云南紅豆杉枝葉中紫杉醇和三尖杉寧堿含量的測(cè)定 |
方法原理： |
本品細(xì)粉用乙酸乙酯-丙酮(1∶1)超聲提取，經(jīng)液相色譜儀分離，在227nm測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算紫杉醇和三尖杉寧堿的含量 |
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件： |
儀器設(shè)備 Agilentl100高效液相色譜儀；G1314A紫外檢測(cè)器。 色譜條件 色譜柱： Angilent Hypersil ODS柱 (4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水( 20∶30∶50) ；柱溫：30℃；流速：1. 0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：227 nm；進(jìn)樣量：10μl。 |
試樣制備： |
對(duì)照品溶液制備 分別精密稱(chēng)取紫杉醇、三尖杉寧堿對(duì)照品適量，各加甲醇制成每毫升約含0.0467mg的溶液，作為對(duì)照品液。 供試品溶液的制備 云南紅豆杉枝葉自然干燥，粉碎，過(guò)60～80目篩，40℃減壓干燥至恒重。稱(chēng)取藥材約2. 00g，精確稱(chēng)定，置磨口具塞三角瓶中，加入乙酸乙酯：丙酮(1∶1) (30ml×2次)，25℃超聲振蕩提取40 min，濾過(guò)，上清液合并，減壓蒸干，殘?jiān)尤胝麴s水10ml，石油醚(60～90℃)萃取( 10ml×3次)，石油醚層棄去，水液再用三氯甲烷萃取(10ml×3次)，合并各次三氯甲烷萃取液，用適量無(wú)水硫酸鈉脫水后，減壓蒸干，殘?jiān)舆m量三氯甲烷溶解，加于氧化鋁柱(中性，4g，內(nèi)徑0.8cm)上，用三氯甲烷洗去未被吸附的雜質(zhì)，再用1%的CH3OH∶CHCl3 (V /V )淋洗，最后用5% CH3OH∶CHCl3 50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓ㄈ葜?ml，甲醇液經(jīng)0. 45μm微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液。 |
操作步驟： |
精密吸取對(duì)照液以及供試品溶液1Oμl，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。 |
附件： |
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備注： |
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參考文獻(xiàn)： |
劉莉，羅佳波等. 云南紅豆杉枝葉中紫杉醇和三尖杉寧堿含量的測(cè)定. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥.2006，17（5)：754～755 |
