| 公開(公告)號 | CN1225551C |
| 公開(公告)日 | 2005.11.02 |
| 申請(專利)號 | CN02140481.X |
| 申請日期 | 2002.07.16 |
| 專利名稱 | 以兩歧雙歧桿菌為主微生態(tài)制劑的液-固結(jié)合發(fā)酵工藝 |
| 主分類號 | C12N1/20 |
| 分類號 | C12N1/20 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 李盛學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 王厚德;李盛學(xué) |
| 地址 | 132200吉林省永吉經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)吉樺路381號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 吉林市達(dá)利專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 張瑜聲 |
| 國省代碼 | 吉林;22 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 以兩歧雙歧桿菌為主微生態(tài)制劑的液——固結(jié)合發(fā)酵方法，其特征在于該方法由下列過程組成：(1)兩歧雙歧桿菌(Bifidobacteriumbifidum)種培養(yǎng)：①原種液體培養(yǎng)：取大豆蛋白胨3.0-7.0g，胰胨3.0-7.0g，酵母浸膏8.0-12.0g，葡萄糖8.0-12.0g，微量鹽溶液30-50ml，其中CaCl20.1-0.4g，MgSO4·7H2O0.3-0.8g，K2HPO40.5-2.0g，KH2PO40.5-2.0g，NaHCO35.0-20.0g，NaCl1.0-3.0g，蒸餾水500-2000ml，調(diào)PH6.5-7.5以此作為原種液體培養(yǎng)基；0.1Mpa下滅菌30min，厭氧下速冷至45℃后，立即接種體積百分比為5％的原種溶液，倒在上述培養(yǎng)基上一層0.5-1.0cm厚度的無菌食用植物油，在厭氧下37℃培養(yǎng)24-48h后，終止培養(yǎng)，于厭氧0-4℃保存?zhèn)溆�；②一級菌種培養(yǎng)：取蛋白胨6.0-10.0g，酵母浸膏3.0-7.0g，葡萄糖8.0-12.0g，低聚異麥芽糖8.0-12.0g，微量鹽溶液30-50ml，其中CaCl20.1-0.4g，MgSO4·7H2O0.3-0.8g，K2HPO40.5-2.0g，KH2PO40.5-2.0g，NaHCO35.0-20.0g，NaCl1.0-3.0g，蒸餾水500-2000ml，PH6.8-7.0，以此作為培養(yǎng)基，0.1MPa下滅菌40min，灌滿無色透明的細(xì)口瓶，立即在培養(yǎng)基上倒一層0.5cm厚度的無菌食用植物油，冷至42℃，立即接種5％原種培養(yǎng)物，以磨口瓶蓋封口，并于37-38℃恒溫下培養(yǎng)24-96h，每隔3h搖動1min，細(xì)胞數(shù)達(dá)2億CFU/ml時，終止培養(yǎng)，厭氧下保存?zhèn)溆�；③二級菌種培養(yǎng)：培養(yǎng)基及操作同一級菌種，只是用無色透明試劑瓶，接種一級菌種10％后，每隔4h搖動1min，培養(yǎng)24-96h，待細(xì)胞數(shù)達(dá)2.0億CFU/ml，終止培養(yǎng)；④三級菌種培養(yǎng)：培養(yǎng)基及各項(xiàng)操作同二級菌種，只是將培養(yǎng)容器改用培養(yǎng)瓶，接種二級菌種10％，細(xì)胞達(dá)1.8億CFU/g時終止培養(yǎng)，室溫下保存?zhèn)溆�；⑤固體培養(yǎng)：取脫脂大豆粉20.0-40.0g、麩皮45.0-65.0g小麥粉8.0-12.0g、脫脂乳粉1.0-3.0g、低聚異麥芽糖1.5-2.5g、葡萄糖0.5-2.0g、酵母浸膏0.05-0.2g，另外加入VB11.0-3.0mg/Kg、VB22.0-6.0mg/Kg生物素0.5-2.0mg/kg，用自來水20-25ml混勻，0.1MPa下滅菌120min，以此作為培養(yǎng)基，冷至42℃無菌下立即接種20％-30％三級菌種，培養(yǎng)物置于無菌無毒不透氣塑料袋中，然后向該塑料袋中回灌無氧無菌N2，于37℃進(jìn)行厭氧培養(yǎng)24-48h，至干基細(xì)胞數(shù)達(dá)4.5億CFU/g，后終止培養(yǎng)，向該培養(yǎng)物中加入經(jīng)165℃滅菌的相當(dāng)于上述固體重量的5-10％葡萄糖、5％淀粉，拌勻后料溫控制在30-40℃冷凍真空下干燥或真空下干燥，使含水量≤9.0％，粉碎過60目篩備用；(2)嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)種培養(yǎng)①斜面培養(yǎng)：取酪蛋白胨8.0-12.0g，牛肉浸膏8.0-12.0g，酵母浸膏3.0-7.0g，葡萄糖3.0-7.0g，檸檬酸二胺1.0-3.0g，吐溫-80(Tween-80)5.0-15.0ml，K2HPO41.0-3.0g，MgSO4·7H2O0.1-0.3g，MnSO4·H2O0.03-0.08g，CaCO310.0-30.0g，瓊脂10.0-20.0g，加蒸餾水1000ml，調(diào)節(jié)PH6.5-7.5以此作為培養(yǎng)基，0.1MPa滅菌30min，立即接種原種培養(yǎng)物，于37℃厭氧培養(yǎng)3-7d，長滿斜面后于厭氧下存放備用；②一級菌種培養(yǎng)：培養(yǎng)基、滅菌同上述原種斜面培養(yǎng)，只是不加瓊脂，接種上述原種斜面培養(yǎng)物，于37±1℃下厭氧培養(yǎng)3-4d，至細(xì)胞數(shù)≥10億CFU/ml終止培養(yǎng)，室溫下保存?zhèn)溆�；③二級菌種培養(yǎng)：培養(yǎng)基及操作方法和滅菌同一級菌種培養(yǎng)，培養(yǎng)液冷至40℃接種一級菌種25％，于35-37℃下厭氧培養(yǎng)3-4d，每隔2h搖動1min，至細(xì)胞數(shù)達(dá)10億CFU/ml時終止培養(yǎng)，室溫下保存?zhèn)溆�；④三級菌種培養(yǎng)：培養(yǎng)基及滅菌、接種同二級菌種，接種二級菌種10％，至細(xì)胞達(dá)10億CFU/ml時終止培養(yǎng)，室溫下保存?zhèn)溆茫虎莨腆w培養(yǎng)：取脫脂大豆粉30.0-40.0g，玉米粉25.0-35.0g，大米粉8.0-12.0g，脫脂乳粉3.0-7.0g，麩皮10.0-20.0g，小麥粉2.0-6.0g，白砂糖0.3-0.7g，NaHCO30.3-0.7g，固體粉料加25-32％水混勻，在0.1MPa下滅菌120min，該培養(yǎng)基冷至50℃時，無菌下接種20％三級菌種，培養(yǎng)物置于無菌無毒不透氣塑料袋中，然后抽真空，并向該塑料袋中回灌無菌無氧N2，于30-35℃無菌下厭氧培養(yǎng)2-3d，待干基細(xì)胞數(shù)80億CFU/g終止培養(yǎng)，然后用45℃熱風(fēng)干燥至含水量為8.0％，粉碎過60目篩備用；(3)嗜熱鏈球菌(StreptococusSalivariussubspthermophilus)種培養(yǎng)各階段培養(yǎng)基及操作方法、細(xì)胞數(shù)均同嗜酸乳桿菌；(4)按兩歧雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌培養(yǎng)物重量比為65-80∶10-15∶10-16配料，分別準(zhǔn)確稱取所需重量，再經(jīng)混勻、無菌下裝入膠囊、計數(shù)壓板、包裝、入庫。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，涉及以兩岐雙岐桿菌為主微生態(tài)制劑的液-固結(jié)合發(fā)酵方法，由兩岐雙岐桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜好熱鏈球菌分別依次經(jīng)原種、1-3級液體培養(yǎng)，和固體培養(yǎng)二階段組成。制劑中三種菌粉重量比依次為65-80∶10-15∶10-16。固體培養(yǎng)先滅菌，后接種20-30％的三級培養(yǎng)物、置于塑料袋，再抽真空向該無毒無菌塑料袋中回灌無氧無菌N2，解決了固體培養(yǎng)不易成為厭氧環(huán)境的關(guān)鍵；如上所述接種量大，比單液或單固培養(yǎng)增加9-10倍；培養(yǎng)中在培養(yǎng)基尤其在固體培養(yǎng)基中加雙岐因子，促進(jìn)活菌增殖至108-109級，且延長保存期，經(jīng)兩年活菌數(shù)由38.6億CFU/g降至5.0億CFU/g；經(jīng)毒理試驗(yàn)證無毒，經(jīng)人群試驗(yàn)，所有受試者均無不良反應(yīng)，具有調(diào)節(jié)腸道菌群，增殖雙岐桿菌、乳桿菌作用。 |
| 國際公布 |
