| 公開(公告)號(hào) | CN1597945A |
| 公開(公告)日 | 2005.03.23 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410021558.4 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.07.27 |
| 專利名稱 | 從蛇毒中提取降纖酶及降纖酶水針制劑的制備方法 |
| 主分類號(hào) | C12N9/50 |
| 分類號(hào) | C12N9/50;C07K16/40;A61K38/48 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 沈陽斯佳科技發(fā)展有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 王光;馬骉;李莉 |
| 地址 | 110179遼寧省沈陽市沈陽高新區(qū)渾南產(chǎn)業(yè)區(qū)世紀(jì)路1號(hào)A座2006號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 遼寧沈陽國興專利代理有限公司 |
| 代理人 | 李叢 |
| 國省代碼 | 遼寧;21 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 從蛇毒中提取降纖酶的制備方法，它包括下述步驟：1).單克隆抗體的制備：將純化并定性的從蛇毒中提取的降纖酶(1g/L)與等體積的完全佐劑混合乳化后，給動(dòng)物免疫；然后用Koher方法取免疫的動(dòng)物的脾細(xì)胞，將所取的免疫動(dòng)物脾細(xì)胞制成細(xì)胞懸液；將所得的細(xì)胞懸液與相同動(dòng)物的骨髓瘤細(xì)胞按(8-15)∶1的比例混合，在30-80％聚乙二醇作用下融合得融合體；將融合體進(jìn)行選擇性培養(yǎng)，首先篩出能分泌與預(yù)定抗原起反應(yīng)的單抗的雜交瘤細(xì)胞，進(jìn)而從中篩出有預(yù)定特異性的雜交瘤細(xì)胞，最終選出可供實(shí)際應(yīng)用且具有穩(wěn)定生長和功能特異的均一細(xì)胞克隆，以腹水法獲得單克隆抗體，純化后備用；2).降纖酶粗品的制備：取蛇毒，將蛇毒經(jīng)離子交換層析法初步純化，得初步純化的降纖酶粗品，備用；3).抗體親和層析柱的制備：3.1取瓊脂糖作為親和層析的載體，用適量的溴化氰活化該載體，得活化的瓊脂糖；3.2取已純化的單克隆抗體溶于硼酸緩沖液中，過濾后加入親和層析柱內(nèi)，然后加入活化的瓊脂糖，在5-20℃下攪拌反應(yīng)15-25小時(shí)，得具有特異親和能力的分離介質(zhì)；3.3裝柱即得到抗體親和層析柱，備用；4).降纖酶的制備：將經(jīng)離子交換層析法初步純化的降纖酶粗品逐漸加入到抗體親和層析柱中，待流出液在檢測(cè)儀上繪出穩(wěn)定的基線后，改用親和層析洗脫液洗脫活性組分，收集洗脫峰，使被吸附的生物活性物質(zhì)從親和介質(zhì)上解吸下來，測(cè)定酶活性，冷凍干燥后即得純化的降纖酶成品。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種從蛇毒中提取降纖酶及降纖酶水針制劑的制備方法，從蛇毒中提取降纖酶的制備方法，它包括下述步驟：單克隆抗體的制備；降纖酶粗品的制備；抗體親和層析柱的制備；降纖酶的制備；降纖酶水針制劑的制備方法，它包括下述步驟：取純化的降纖酶，將其加入到適量的注射用水中溶解，得溶解液，在每1000ml溶解液中加入5-20g氯化鈉穩(wěn)定劑，分裝，即得降纖酶水針制劑。本發(fā)明降纖酶制備工藝簡單，適合規(guī)�；a(chǎn)，水針制劑穩(wěn)定性高，并可長期保存。 |
| 國際公布 |
