骨髓間充質(zhì)干細胞的規(guī)�；苽浞椒�
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公開(公告)號
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CN1563363A
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公開(公告)日
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2005.01.12
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申請(專利)號
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CN200410017587.3
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申請日期
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2004.04.09
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專利名稱
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骨髓間充質(zhì)干細胞的規(guī)�；苽浞椒�
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主分類號
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C12N5/08
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分類號
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C12N5/08
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權
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申請(專利權)人
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華東理工大學
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發(fā)明(設計)人
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周燕;譚文松;胡靜波;蔣丹丹
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地址
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200237上海市梅隴路130號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構
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中原信達知識產(chǎn)權代理有限責任公司
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代理人
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羅大忱
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國省代碼
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上海;31
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主權項
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一種骨髓間充質(zhì)干細胞的規(guī)模化制備方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)MSCs分離培養(yǎng)將從骨髓細胞懸液中分離的單個核細胞，接種在添加了5％～20％胎牛血清的α-MEM中進行原代培養(yǎng)，12～48小時后更換培養(yǎng)液，除去未貼壁細胞，原代細胞長至匯合后以0.25％胰酶+0.02％EDTA消化細胞；(2)MSCs的微載體系統(tǒng)懸浮培養(yǎng)細胞接種于預先硅化過的攪拌懸浮培養(yǎng)裝置中，與CT-3微載體共同培養(yǎng)，采用10～30rpm轉(zhuǎn)速進行接種，6～24小時后提高轉(zhuǎn)速至20～80rpm進行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37℃、5％CO2、飽和濕度，生物反應器系統(tǒng)設定操作條件為：pH7.0～7.2，溫度37℃，溶氧為30％～50％空氣飽和度；(3)收獲細胞細胞長滿微載體后，以胰酶或膠原酶消化微載體表面包被的膠原，使細胞從微載體表面脫落下來，通過靜止沉降法分離微載體和細胞。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種骨髓間充質(zhì)干細胞的規(guī)模化制備方法。具體包括如下步驟：1.MSCs分離培養(yǎng)，2.MSCs的微載體系統(tǒng)懸浮培養(yǎng)，3.收獲細胞。采用本發(fā)明的方法，可以消除常規(guī)靜態(tài)培養(yǎng)系統(tǒng)中的面積限制以及營養(yǎng)物、代謝副產(chǎn)物的濃度梯度，避免了頻繁的傳代操作，有利于細胞生長和保持干細胞特性，采用生物反應器培養(yǎng)，可收獲1×109細胞，真正實現(xiàn)規(guī)模化制備骨髓間充質(zhì)干細胞，為工程化組織構建、細胞治療、基因治療或其它科學研究提供大量的種子細胞。
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國際公布
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