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臨床生物化學(xué):第三節(jié) 細(xì)胞調(diào)節(jié)因子

一、概述細(xì)胞調(diào)節(jié)因子是一組小分子或中等分子量的可溶性蛋白質(zhì)(多肽)與糖蛋白,具有強(qiáng)大的和多方面的生物效應(yīng)。它們均作用于特異的靶細(xì)胞表面受體,通過細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)和第二信使介導(dǎo),調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、生長、出血、骨發(fā)生、免疫過程、創(chuàng)傷的愈合、炎癥反應(yīng)等!

一、概述

細(xì)胞調(diào)節(jié)因子是一組小分子或中等分子量的可溶性蛋白質(zhì)(多肽)與糖蛋白,具有強(qiáng)大的和多方面的生物效應(yīng)。它們均作用于特異的靶細(xì)胞表面受體,通過細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)和第二信使介導(dǎo),調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、生長、出血、骨發(fā)生、免疫過程、創(chuàng)傷的愈合、炎癥反應(yīng)等。較大分子量的調(diào)節(jié)因子前身物質(zhì)經(jīng)蛋白酶切水解為較小的活性分子(成熟分子),糖蛋白分子中的含糖結(jié)構(gòu)對其藥理動力學(xué)有顯著影響。已知不少疾病過程與細(xì)胞因子生成的失平衡有密切聯(lián)系,它們異常過度的分泌可誘發(fā)和延長病理過程,有些疾病可惡化,或受到一些起始因子(如病毒與細(xì)胞的感染等)的作用后,造成細(xì)胞分泌異常而發(fā)病。細(xì)胞因子的生成異常亦與一些免疫介導(dǎo)的疾病有關(guān),如過敏、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫性全細(xì)胞缺乏癥、牛皮癬等。細(xì)胞因子廣泛地介入惡性腫瘤的增殖分化、轉(zhuǎn)移,如多發(fā)性骨髓瘤,急性白血病,慢性淋巴細(xì)胞白血病,霍奇金病。細(xì)胞因子更廣泛地從多層次以多種形式介導(dǎo)一系列炎癥發(fā)病進(jìn)程,如胰腺炎、毛細(xì)管滲出性綜合征、骨質(zhì)疏松癥、創(chuàng)傷愈合、腎衰等。因此,近年來,細(xì)胞因子的分泌表達(dá)及其作用引起多方面專家的關(guān)注和研究,細(xì)胞因子的檢測也迅速發(fā)展起來。

本節(jié)從生物化學(xué)與分子生物學(xué)基礎(chǔ)對其發(fā)展中的幾個基本問題作一簡介。

細(xì)胞因子的發(fā)現(xiàn)近半個世紀(jì),由于其生物學(xué)作用的多效性,細(xì)胞來源的多樣性,曾經(jīng)賦予過不少名稱。自80年代基因工作和蛋白質(zhì)的優(yōu)化技術(shù)發(fā)展,細(xì)胞因子基因被克隆至今,雖然多種細(xì)胞因子的蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)被闡明,其相應(yīng)的mRNA及DNA序列分析及其染色體定位被確認(rèn),但由于一種細(xì)胞因子可由多種細(xì)胞產(chǎn)生,不同細(xì)胞來源的細(xì)胞因子又有相似的生物學(xué)作用(多效性),加上生物學(xué)作用的環(huán)境依賴性,因此命名至今不夠滿意,更不甚統(tǒng)一,分類上的意義也是相對的,有的側(cè)重考慮其細(xì)胞來源,有的著重于參照其生物學(xué)作用,見表2-12。

表2-12 細(xì)胞因子的分類

1.促紅細(xì)胞生成素(EPO)5.腫瘤壞死因子(TNF)
2.集落刺激因子(CSF)腫瘤壞死因子α(TNF-α)
粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)腫瘤壞死因子β(TNF-β)
粒細(xì)胞集落bhskgw.cn/kuaiji/刺激因子(G-CSF)6.干擾素(IFN)
巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF或CSF-1)干擾素α-1(IFNα-1)
干細(xì)胞因子(CSF)干擾素α-2(IFNα-2)
白介素-3或多集落刺激因子(IL-3或multi-F)干擾素β(IFNβ)
白血病抑制因子(LIF)干擾素γ(IFNγ)
胰島素樣生長因子(IGF)7.轉(zhuǎn)化生成因子(TGF)
3.血小板生成素(TPO)轉(zhuǎn)化生長因子β-1(TGFβ-1)
4.白介素(IL)轉(zhuǎn)化生成因子β-2(TGFβ-2)
白介素-1α(IL-1α)轉(zhuǎn)化生長因子β-3(TGFβ-3)
白介素-1β(IL-1β)8.巨噬細(xì)胞炎性蛋白(MIP)
白介素-2(IL-2)巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP-1α)
白介素-3(IL-3或multi-CSF)巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP-1β)
白介素-4到白介素-13(IL-4,IL-5,IL-6,IL-7,IL-8,IL-9,IL-10,IL-12,IL-13)巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)
9.其他
單核細(xì)胞化學(xué)吸附蛋白-1(MCP-1)
血小板因子4(PF4)
β-凝集球蛋白
黑色瘤生長刺激活性(GROimgSA)

有些研究者按其主要特征,歸納為以下幾類:

1.天然免疫的效應(yīng)分子(如α/β干擾素,TNF,IL-1,IL-6等)。

2.炎癥反應(yīng)的激活因子(IL-1,IL-5,IFN-1等)。

3.淋巴細(xì)胞活化生成與分化的調(diào)節(jié)因子(IL-2,IL-4,TGFβ等)。

4.未成熟免疫細(xì)胞生長分化的刺激因子(IL-3,IL-7,GM-CSF,M-CSF,G-CSF)。

也有一些研究者依據(jù)其生物學(xué)特征從臨床病理出發(fā)分為以下6大類:

1.炎癥因子(介導(dǎo)炎癥發(fā)生發(fā)展)又稱為炎癥反應(yīng)因子(inflamatoryfactor)(如IL-1,IL-6,IL-8,TNF等)。

2.殺傷因子(cytotoxicfactor)(如TNF-γ,TNF-β)。

3.干擾素(有抗病毒作用的IFN-γ,β,α)。

4.白介素類,促細(xì)胞活化、增殖、分化、調(diào)節(jié)其功能。

5.成血因子(hematopoieticfactor)(SCF,IL-3,GM-CSF,G-CSF,M-CSF等)

6.轉(zhuǎn)化生長因子(transforminggrowthfactor,TGF)。

最近由于分子生物學(xué)研究的進(jìn)展,將已發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子以分子結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ),結(jié)合其基因組合受體類型,將它們歸納為以下6個不同的家族,列表2-13下可供參考。

表2-13 細(xì)胞因子的結(jié)構(gòu)型家族

家族(family)細(xì)胞因子(cytokines)受體類型(receptortype)
Haematopoietins(4α-helicalbundles)IL-2,IL-3,IL-4,IL-5,IL-6,IL-7,IL-8,IL-9,IL-14,G-CSF,GM-CSF,CNTF,OSM,LIF,EpoCytokinereceptorclassI
IL-10,IFNαIFNβIFNγCytokinereceptorclassII
EGF(β-sheet)EGF,TGFαTyrosinekinase
FGFα,F(xiàn)GFβSplittyrosinekinase
IL-1α,IL-1β,IL-1RαIL-1receptor
TNF(jellyrollmotif)TNFα,TNFβ,LTβ
CysteineknotNGF
TGFβ1,TGFβ2,TGFβ3Serine/threoninekinase
PDGF,VEGFTyrosinekinase
Chemokines
(triple-strandedantiparallelβ-sheetinGredkkeymotif)IL-8,MIP-1α,MIP-1β,MIP-2,PF-4,PBP,I-309/TCA-3,MCP-1,MCP-2,MCP-3,γIP-10Rhodopsinsuperfamily

各個細(xì)胞因子的生物化學(xué)及其分子生物學(xué)正在積累大量的資料,學(xué)者可從以下幾方面了解和收集有關(guān)材料加以深入系統(tǒng)的研究。

1.使用過的其它名稱,多數(shù)細(xì)胞因子在發(fā)現(xiàn)它們存在的早期,曾基于其生物效應(yīng)的某一側(cè)面或其發(fā)現(xiàn)的歷史、細(xì)胞來源以及生物檢測方法的使用而使用過多種名稱,這些名稱不一定是反映該因子最本質(zhì)的方面,并易混淆,宜予注意。

2.分子大小、分子特征、分子量。

3.氨基酸序列和三維空間結(jié)構(gòu)(包括來自X線及NMR獲得的數(shù)據(jù))

4.交叉反應(yīng)性(crossreactivity),比較不同種屬(如人和鼠)細(xì)胞因子氨基酸序列的一致性及其差異。

5.已知可以分泌該細(xì)胞因子的細(xì)胞類型及細(xì)胞因子的表達(dá)調(diào)控。

6.主要物理化學(xué)性質(zhì),包括前體的分子量和去除信號肽后成熟分子的分子量及其酶切點(diǎn)。

7.基因結(jié)構(gòu)及其染色體定位,包括有關(guān)外顯子和內(nèi)含子的基因結(jié)構(gòu)及相應(yīng)的氨基酸序列。

8.受體的描述、類型,包括蛋白質(zhì)的主區(qū)域細(xì)胞膜結(jié)合的模式和糖基化的程度,受體細(xì)胞分布,受體的物理化學(xué)性質(zhì),氨基酸序列,染色體定位等。

9.受體后信號傳遞體制和類型-細(xì)胞內(nèi)信號傳遞途徑的了解情況。

二、細(xì)胞調(diào)節(jié)因子實(shí)驗(yàn)室檢測的簡介

研究細(xì)胞因子在各種病理生理情況下的活動、分泌以及在治療中使用細(xì)胞因子制劑的效應(yīng),都要求能有效地檢測體內(nèi)細(xì)胞因子的含量(濃度水平),以及檢測細(xì)胞因子的功能(生物效應(yīng))。

從前以細(xì)胞因子的生物學(xué)特征作為其含量分析的基礎(chǔ),免疫分析及其它免疫化學(xué)或生物化學(xué)技術(shù)亦可用于此細(xì)胞因子的測定和部分鑒定,表2-14總結(jié)了已用于細(xì)胞因子功能測定和濃度(含量)測定的方法。

表2-14 細(xì)胞因子分析

生物分析酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)
動物分析其它
增殖分析受體結(jié)合分析
骨髓集落形成分析免疫化學(xué)程序
細(xì)胞毒性或細(xì)胞穩(wěn)定bhskgw.cn/shiti/性分析細(xì)胞或細(xì)胞中的測定
抗病毒分析勻漿生物分析或免疫分析
次級分子分泌的誘導(dǎo)免疫組化或免疫細(xì)胞分析
趨化作用或化學(xué)促進(jìn)作用分析流式細(xì)胞計(jì)數(shù)
細(xì)胞因子分泌活性的抑制酶聯(lián)免疫印跡(ELISPOT)
免疫分析反相溶血斑分析
放射免疫分析(RIA)細(xì)胞因子mRNA原位雜交
免疫放射光譜分析(IRMA)

人細(xì)胞因子實(shí)驗(yàn)測定的標(biāo)準(zhǔn)化:人細(xì)胞因子的實(shí)驗(yàn)測定中仍存在諸多問題,選擇分析方法不恰當(dāng)則可能導(dǎo)致混亂甚至錯誤的結(jié)論。有時有必要同時選擇幾種方法分析某些細(xì)胞因子。生物分析方法特異性差,那些使用細(xì)胞株的生物分析可能與不同細(xì)胞因子反應(yīng),而且可受非細(xì)胞因子分子的影響。用于維持細(xì)胞生物的細(xì)胞因子能強(qiáng)烈地影響某些依賴細(xì)胞對一些細(xì)胞因子的反應(yīng)程度。有的細(xì)胞在連續(xù)傳代后可能失去對某些細(xì)胞因子的反應(yīng)性,此外,由于抑制劑如受體拮抗劑、可溶性細(xì)胞因子受體或其他拮抗劑分子的存在,測得細(xì)胞因子活性結(jié)果可能會比實(shí)際活性偏低。

由于蛋白酶的存在或與抑制劑如可溶性受體形成復(fù)合物,免疫分析能測得失去生物活性或具部分生物活性的細(xì)胞因子分子,并可受到基質(zhì)效應(yīng)的影響。此外,特異性問題影響了細(xì)胞因子mRNA測定,而mRNA水平亦不一定與具生物活性的細(xì)胞因子水平相一致。其它影響自動免疫分析方法準(zhǔn)確性的問題還包括抗體的選擇、分析的不均勻、分子糖基化的不同、寡聚體的形成及循環(huán)受體的影響,雖然免疫分析的結(jié)果并不一定反映細(xì)胞因子的生物活性,但一般而言,免疫分析及其它配體結(jié)合分析都更容易標(biāo)準(zhǔn)化。

目前,英國已能提供下列細(xì)胞因子的標(biāo)準(zhǔn)化參考試劑:IL-1α,IL-1β,IL-2-9,GM-SCF,M-CSF,TGF-α,TGF-β,TGF-γ,SCF,LIF(白血病抑制因子),IFN-α1,IFN-α2b,IFNγ,還能供應(yīng)IFN-α2a,IFN-β及IFN-γ的國際標(biāo)準(zhǔn)。但于細(xì)胞因子分子的不均勻,其分析的標(biāo)準(zhǔn)化仍是問題。因此,要求各實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞因子分析應(yīng)參考國際標(biāo)準(zhǔn)。某些細(xì)胞因子具有易被破壞的特性,從而要求非常細(xì)致和標(biāo)準(zhǔn)化的取樣。

隨著細(xì)胞因子在治療上的不斷應(yīng)用,其測定方法亦得到了廣泛的發(fā)展,臨床檢師必須選用正常的分析方法支持臨床醫(yī)生,為臨床診斷提供相對簡易的實(shí)驗(yàn)程序和準(zhǔn)確的操作技術(shù)。

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