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實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué):第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分類方法

隨著實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的進(jìn)展,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分類方法愈來愈細(xì),也更加科學(xué)化,通過了解下面的幾種分類方法,同時(shí)可扼要地了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的來源和發(fā)展情況。一、按實(shí)際用途分類1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(Laboratory animals)是專門培育供實(shí)驗(yàn)用的動(dòng)物,主要指作為醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、生物學(xué)、獸醫(yī)學(xué)等的科研…

隨著實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的進(jìn)展,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分類方法愈來愈細(xì),也更加科學(xué)化,通過了解下面的幾種分類方法,同時(shí)可扼要地了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的來源和發(fā)展情況。

一、按實(shí)際用途分類

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(Laboratory animals)是專門培育供實(shí)驗(yàn)用的動(dòng)物,主要指作為醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、生物學(xué)、獸醫(yī)學(xué)等的科研、教學(xué)、醫(yī)療、鑒定、診斷、生物制品制造等需要為目的而馴養(yǎng)、繁殖、育成的動(dòng)物。例如小鼠和大鼠是首先按實(shí)驗(yàn)要求,嚴(yán)格進(jìn)行培育的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,其次如地鼠類、豚鼠、其它嚙齒類、鵪鶉等亦已實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化。

2.經(jīng)濟(jì)動(dòng)物(Economical animals)或稱家畜家禽(domestic animals and domestic fowl)是指作為人類社會(huì)生活需要(如肉用、乳用、蛋用、皮毛用等)而馴養(yǎng)、培育、繁殖生產(chǎn)的動(dòng)物。轉(zhuǎn)為實(shí)驗(yàn)用的有:產(chǎn)業(yè)家畜(豬、馬、牛、羊、雞、鴨、鵝、鴿、、魚類等)和社會(huì)家畜(犬、、金魚等),其中一部分雖已培育成能達(dá)到作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的目標(biāo),但同具有高標(biāo)準(zhǔn)水平的鼠類相比,其品質(zhì)還不能說是很高的。

3.野生動(dòng)物(Wild amimals)是指作為人類需要,從自然界捕獲的動(dòng)物,沒有進(jìn)行人工繁殖、飼養(yǎng)的動(dòng)物。例如兩棲類、爬蟲類(青、蟾蜍、蠑螈、水等);魚類(鯽魚、泥鰍等);無脊椎動(dòng)物(蛤蜊類、墨魚類、類、海膽類、蠅類、蚊類、蟑螂等)鳥類;嚙齒類(如黑線倉(cāng)鼠、長(zhǎng)爪砂鼠、黑線姬鼠等野鼠);靈長(zhǎng)類(猿猴)等,這些野生動(dòng)物,除少數(shù)外,一般均不能進(jìn)行人工繁殖生產(chǎn)。

4.觀賞動(dòng)物(Exihibiting animals)是指作為人類玩賞和公園里供人觀賞而飼養(yǎng)的動(dòng)物,如踏車小白鼠、玩賞犬和貓等。

實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物來源于野生動(dòng)物,從野生到家養(yǎng),通過純化(定向培育)發(fā)展成多種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。野生動(dòng)物家畜化,家畜動(dòng)物種化,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物純化,是野生動(dòng)物演變?yōu)閷?shí)驗(yàn)動(dòng)物的過程。

這里必須強(qiáng)調(diào)指出,以往,把實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物非常含糊地稱為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,在習(xí)慣上誤認(rèn)為:實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物概念是一樣的,現(xiàn)在必須加以糾正,兩者應(yīng)該明確區(qū)分。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物就是指一切用于實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物,其中除了符合嚴(yán)格要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外,還包括家畜(產(chǎn)業(yè)家畜和社會(huì)家畜)和野生動(dòng)物,這三類統(tǒng)稱為實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物(Animals for Research,或Expermental Animals)。將實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物區(qū)分為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,家畜和野生動(dòng)物這三類動(dòng)物是很重要的,也是很必要的,因?yàn)樵趧?dòng)物實(shí)驗(yàn)上,特別重視反應(yīng)的重復(fù)性,這三類動(dòng)物有較大的差異。所謂反應(yīng)的重復(fù)性就是指不同的實(shí)驗(yàn)工作者,在不同的實(shí)驗(yàn)地點(diǎn),不同的時(shí)間,用同一品系動(dòng)物所做的的實(shí)驗(yàn),幾乎沒有差異地均能獲得相同的結(jié)果。這就希望動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)苓_(dá)到象化學(xué)分析天平稱量那樣的精確度,對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來說,要求能達(dá)到化學(xué)試劑那樣的純度。為了達(dá)到這個(gè)目的,就必須同時(shí)進(jìn)行極為嚴(yán)格的遺傳和環(huán)境的控制,兩者不能偏廢。這對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來說是可以作到的,對(duì)野生動(dòng)物幾科是不可能的。對(duì)家畜來說,并不具備這些條件,雖然,家畜中某個(gè)品種的確立,亦有一定程度的遺傳學(xué)控制和人工飼養(yǎng)管理?xiàng)l件,但同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的嚴(yán)格要求相比,還是相差懸殊。再?gòu)挠N的角度來看,家畜育種的遺傳性質(zhì)目標(biāo),不外乎是按畜產(chǎn)上要求的泌乳能力(乳牛),產(chǎn)蛋能力(家禽),肥育能力(肉用家畜),產(chǎn)毛能力(皮毛動(dòng)物)等來進(jìn)行的,其選種的方法是擇優(yōu)除劣,即排除低生產(chǎn)性能的遺傳形質(zhì)和易感疾病形質(zhì)。而實(shí)驗(yàn)動(dòng)物育種的形質(zhì)目標(biāo),是按研究上的需要來考慮的,可利用的形質(zhì)是非常多的,除了培育有高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)性能的形質(zhì)外,凡是在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的同人相類似的疾病,都要通過遺傳學(xué)手段積極的把它培育后保留下來,建立“疾病模型”的品系。不僅如此,對(duì)耐病性形質(zhì)的的培育的方向也是多方面的,既要培育耐病性高的形質(zhì)(例如低癌品系),同時(shí)又要培育耐病性低的形質(zhì)(例如高癌品系),以適應(yīng)研究的需要,這就同家畜的高性能育種方向安全不同,而且家畜也是很難作到這些。由引可以看出,將“實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物”區(qū)分為上述三類動(dòng)物是完全必要的。

二、按遺傳學(xué)控制原理分類

bhskgw.cn/Article/在化學(xué)實(shí)驗(yàn)中,要準(zhǔn)備很多不同種類和不同純度的試劑,按其含有雜質(zhì)的多少可分為普遍的、實(shí)驗(yàn)室的、化學(xué)純的、分析純的等不同純度的試劑,分別用于不同目的和要求的試驗(yàn)。在物理實(shí)驗(yàn)中,亦同樣要制造出精密度各不相同的各種測(cè)定儀器、電子計(jì)算機(jī)等,促使物理學(xué)試驗(yàn)達(dá)到更加精確、迅速和完整的地步。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被稱為“活的試劑”的“活的測(cè)定器”。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí),就需要有純度高的、敏感性強(qiáng)的,適合各種實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊蟮慕】档钠废祫?dòng)物。目前,按遺傳學(xué)控制方法,根據(jù)基因純合的程度,把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分類為:近交系、突變系、雜交群、封閉群四類,其規(guī)定要求各不相同,而雜種(Mongel)是未經(jīng)遺傳學(xué)控制而進(jìn)行無計(jì)劃交配繁殖的動(dòng)物,故不屬于本分類范圍。

從遺傳角度分類,也可將其分為同因型和不同基因型兩類動(dòng)物。同基因型動(dòng)物又可分為近交系動(dòng)物、同源導(dǎo)入近交系(近交同類系)動(dòng)物、異單基因近交系(近交同類突變系)動(dòng)物、重組近交系動(dòng)物、突變系動(dòng)物、雜交F1代動(dòng)物、單親二倍體動(dòng)物和嵌合體動(dòng)物。不同基因動(dòng)物一般是指遠(yuǎn)交系動(dòng)物和封閉群動(dòng)物。每種動(dòng)物在遺傳學(xué)、生物學(xué)特性上和應(yīng)用上都各具特點(diǎn)。

同基因型動(dòng)物主要以近交系動(dòng)物為代表,在繁殖中根據(jù)目的不同分別采用近交、雜交、或連續(xù)回交、或回交互交等特殊的方式培育而成。

不同基因型或雜合型的動(dòng)物主要來源于遠(yuǎn)交雜種或近交純種的動(dòng)物,一般稱為遠(yuǎn)交系動(dòng)物或封閉群動(dòng)物。種子來源于近交系或有近交歷史的動(dòng)物。其基因純度與近交系相比差異不大,來源于沒有近交歷史的種群而繁殖的遠(yuǎn)交系動(dòng)物,其基因變異情況差別很大。一般來說這些動(dòng)物采用隨機(jī)交配的方法,盡量避免選擇,避免近交,保持一定的遺傳異質(zhì)性。

遠(yuǎn)交系動(dòng)物和封閉群動(dòng)物的特點(diǎn),主要為高產(chǎn)、適應(yīng)性和抗病性強(qiáng),常用于生殖、生理、腫瘤、毒理、藥理、免疫、微生物等研究工作以及一些藥品、生物制品的制造和鑒定工作,目前常用的遠(yuǎn)交系動(dòng)物有NIH、ICR等在我國(guó)則為昆明小鼠。

不同基因型的動(dòng)物與基因型相同的動(dòng)物相比在以下幾個(gè)方面存在差異,見表1-4。

表1-4 同基因型與不同基因型動(dòng)物比較

bhskgw.cn/zhicheng/
特 性同 基 因 型不 同 基 因
近 交 系F1代雜交動(dòng)物遠(yuǎn) 交 系F2系或雜種
同基因性不高
純合性低(可變性)
長(zhǎng)期遺傳穩(wěn)定性
可檢定的客觀指標(biāo)中等
表型一致性較高中等
獨(dú)特性較高中等
國(guó)際公布很廣很廣有限極有限
背景資料中等中等

按遺傳學(xué)控制方法,目前將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為下列幾類,其主要特點(diǎn)分述如下:

1.近交系動(dòng)物(Inbred strain animals):近交系動(dòng)物一般稱為之純系動(dòng)物。是采用兄妹交配(BXS——brother sister)或親子交配(PXO——parent xoffspring,父母與子女交配),連續(xù)繁殖20代以上而培育出來的純品系動(dòng)物。一般以小鼠為典型代表。所以把嚙齒類動(dòng)物同胞兄妹連續(xù)交配達(dá)20代以上的品系稱為近交系,其近交系數(shù)可達(dá)99.8%,亦可用親子(父女、母子)連續(xù)交配20代以上達(dá)到近交目的,其近交系數(shù)可達(dá)99%。但必須用年輕的雙親同其子女交配,而且親子交配不能同兄妹交配混用。很多學(xué)者認(rèn)為,較大動(dòng)物的純種培育很難獲得成功,因?yàn)槌晒β实,往往成為?jīng)濟(jì)上的學(xué)生負(fù)擔(dān)。例如犬和貓連續(xù)兄妹交配20代需經(jīng)20年左右。雞和兔亦也花費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間。但目前畢竟因研究上的特別需要,已培育出兔、犬、貓、雞、羊、獵等的若干近交系。有些學(xué)者提議:禽類和兔的血緣系數(shù)達(dá)到80%以上時(shí)(相當(dāng)兄妹交配四代),即可稱為近交系。

2.突變系動(dòng)物(Maiant strain animals)是保持有特殊的突變基因的品系動(dòng)物,也就是正常染色體的基因發(fā)生了變異的、具有各種遺傳缺陷的品系動(dòng)物。生物在長(zhǎng)期繁殖過程中,子代突變發(fā)生變異,其變異的遺傳基因等位點(diǎn)可遺傳下去,或即使沒有明確的遺傳基因等位點(diǎn),但經(jīng)過淘汰和選拔后,仍能維持穩(wěn)定的遺傳形質(zhì)。這種變化了的能保持遺傳基因特性的品系,稱之為突變品系。在小鼠和大鼠中,通過自然突變和人工定向突變,已培育出很多突變品系動(dòng)物。

3.雜交群動(dòng)物(Hybrid animals)也稱雜交一代動(dòng)物或系統(tǒng)雜交動(dòng)物。是指兩個(gè)近交品系動(dòng)物之間進(jìn)行有計(jì)劃交配所獲得的第一代動(dòng)物。簡(jiǎn)稱F1動(dòng)物。一般只用子一代F1,有時(shí)也用子二代F2。例如由C57BL/6J和DBA/2小鼠交配后培育的第一代為DBF1或D­2B6F1,C57L/J和A/He交配后的第一代為L(zhǎng)AF1。

4.封閉群動(dòng)物(Closed colony animals)是指一個(gè)動(dòng)物種群在五年以上不從外部引進(jìn)其他任何品種的新血緣,由同一血緣品種的動(dòng)物進(jìn)行隨意交配,在固定場(chǎng)所保持繁殖的動(dòng)物群。一般對(duì)群的大小、封閉年月、繁殖結(jié)構(gòu)等均有明確的規(guī)定?煞譃槠鹪从诮幌档⒉贿M(jìn)行兄妹交配的維持群和不起源于近交系而亦不進(jìn)行兄妹交配的維持異。也就是在這固定的一群動(dòng)物中,有的可能有近交關(guān)系,有的則無近交關(guān)系,但都要避免兄妹交配,也要避免親子、表兄妹、侄伯之間相互交配,保持其一定的遺傳差異。例如ddN小鼠,惠斯脫(Wistar)大鼠、各研究所長(zhǎng)期自行繁殖的昆明種(瑞士種)小鼠、青紫兔、新西蘭白兔、大白耳兔、豚鼠等均屬此類。

三、按微生物學(xué)控制原理分類

在飼養(yǎng)動(dòng)物的環(huán)境中及動(dòng)物的體表、粘膜和消化道內(nèi)容物中,均存在著大量種類繁多的微生物和寄生蟲,如何控制微生物是特別重要的。一個(gè)優(yōu)?

■[此處缺少一些內(nèi)容]■

,故用藥物將卵周圍滅菌后移入無菌隔離器內(nèi)使其孵化即可,而且,這些動(dòng)物一般在在出生后能自力采食,故較易育成。

2.悉生動(dòng)物(Cnotobiotes animals)是指機(jī)體內(nèi)帶著已知微生物(動(dòng)物或植物)的動(dòng)物。此種動(dòng)物原是無菌動(dòng)物,系人為的將指定微生物叢投給其體內(nèi),例如使大腸桿菌定居在無菌小鼠體內(nèi),在進(jìn)行微生物檢查時(shí),僅能檢出大腸桿菌。亦有人工投給二種以上的已知微生物。悉生動(dòng)物一般分為單菌(Monoxenie)、雙菌(Dixenie)、三菌(Trixenie),或多菌(Polyxenie)動(dòng)物。此種動(dòng)物同無菌動(dòng)物一樣是放在隔離器內(nèi)飼育的,但因其帶有已知的微生物,故隔離器內(nèi)有微生物及其代謝產(chǎn)物的污染。例如,人工投給的微生物,除可在飲水中增殖外,還能在隔離器內(nèi)放出大量的氨氣。

3.無特定病原體動(dòng)物(Specefic pathogen-free animals)是指機(jī)體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲存在的動(dòng)物,簡(jiǎn)稱SPF動(dòng)物。但非特定的微生物和寄生蟲是允許存在的,故其實(shí)際上就是指無傳染病的健康動(dòng)物。由于用疫苗和藥物進(jìn)行預(yù)防及治療,或用淘汰帶菌動(dòng)物來作出SPF動(dòng)物的方法并不實(shí)用(既浪費(fèi)時(shí)間,又難保確實(shí)除去病原)。故一般大多先培育出無菌動(dòng)物或悉生動(dòng)物后,再把其轉(zhuǎn)移到有封閉系統(tǒng)(Barrier System)的設(shè)施中飼育繁殖。原則上SPF動(dòng)物室內(nèi)是不允許存在病原菌的,但在封閉系統(tǒng)環(huán)境中,難免有很多非病原性微生物會(huì)逐漸進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體內(nèi),故亦有人把這個(gè)轉(zhuǎn)移過程稱之為通常動(dòng)物化。SPF動(dòng)物的祖先是無菌動(dòng)物,按理來說,無菌動(dòng)物的子宮內(nèi)和卵中應(yīng)該是無菌的,然而,有些病毒實(shí)際上是通過親代傳給胎兒的,因此,在作出無菌動(dòng)物和SPF動(dòng)物之前,必須充分考慮這個(gè)問題。

4.清潔普通動(dòng)物(Clean conventional animal,CCV)(亦稱最低限度疾病動(dòng)物MOA)或稱清潔動(dòng)物(Clean animal,CL)

來自屏障系統(tǒng)的SPF動(dòng)物,飼養(yǎng)在設(shè)有兩條走廊的,溫濕度恒定的普通設(shè)施中的動(dòng)物。墊料、飼料、用具等均應(yīng)經(jīng)過高壓消毒。飲水pH為2.5~2.8,鼠盒上帶過濾帽,空氣亦應(yīng)經(jīng)過一定的過濾,工作人員穿干凈服裝操作,此類動(dòng)物的微生物控制標(biāo)準(zhǔn)基本與SPF相同,不同之處為血清病毒抗體檢查(腦脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒……)經(jīng)?蓹z出一定滴度的抗體,但不允許出現(xiàn)臨床癥狀和臟器的病理變化和自然死亡。

普通動(dòng)物(Conventioal animals)是未經(jīng)積極的微生物學(xué)控制,普遍地飼養(yǎng)在開放衛(wèi)生環(huán)境里的動(dòng)物。墊料和食物不經(jīng)高壓消毒,飲水為自來水,不喂青飼料。鼠應(yīng)排除肺炎病毒,沙門氏菌和鏈球菌,地鼠不應(yīng)有蟯蟲。普遍動(dòng)物只能供教養(yǎng)和一般性實(shí)驗(yàn),不適用于研究實(shí)驗(yàn)。

四、按我國(guó)實(shí)際情況分類

國(guó)外將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為五級(jí)和四級(jí),以用于不同的實(shí)驗(yàn)。我國(guó)現(xiàn)在尚未劃分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)。1980年10月在北京召開醫(yī)學(xué)科研存設(shè)計(jì)座談會(huì),有30多位國(guó)內(nèi)著名專家教授參加,根據(jù)我國(guó)具體條件,這次會(huì)議對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行了分級(jí),列舉如下:

Ⅰ級(jí):用于教學(xué)示教的動(dòng)物,應(yīng)沒有能傳染給人的疾病,如結(jié)核、假結(jié)核、痢疾、傷寒沙門氏菌感染、出血性黃疸螺旋體病、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)腦膜炎病毒感染,皮膚霉菌病,體外寄生蟲病等。

Ⅱ級(jí):用于一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn),除Ⅰ級(jí)標(biāo)準(zhǔn)外,動(dòng)物在一般實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室內(nèi)繁殖飼養(yǎng),種系清楚,不雜亂,沒有動(dòng)物所特有的疾病,如脫腳病(鼠痘)、流行性腹病毒、致死性腸道病毒、Pillifomis菌、出血性敗血性巴斯德菌、支氣管敗血性傳代菌感染、絲蟲病、球蟲病、蠕蟲(除蛔蟲外)病等。

Ⅲ級(jí):即所謂無特定病原體(Specific Pathogen free,SPF)動(dòng)物,除Ⅱ級(jí)標(biāo)準(zhǔn)外,動(dòng)物為部腹產(chǎn)或子宮切除產(chǎn),均按純系要求繁殖,在隔離器內(nèi)或?qū)恿魇覂?nèi)飼養(yǎng),只有一些不致病的細(xì)菌叢,沒有各種致病的病原體。

Ⅳ級(jí):即無菌(Germ free,GE)動(dòng)物,在全封閉無菌條件下飼養(yǎng)的純系動(dòng)物,動(dòng)物體內(nèi)外不帶有任何微生物和寄生蟲(包括絕大部分病毒)。

Ⅲ級(jí)及Ⅱ級(jí)動(dòng)物的要求較高也較貴,只宜用于特殊目的和要求的實(shí)驗(yàn)。

最近國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專家和科技工作者研究認(rèn)為,現(xiàn)在我國(guó)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四級(jí):一級(jí)為普通動(dòng)物;二級(jí)為清潔動(dòng)物;三級(jí)為無特定原體動(dòng)物;四級(jí)為無菌動(dòng)物和悉生動(dòng)物。

普通動(dòng)物(CV)要求必須不帶有人獸共患病原體及體外寄生蟲。清潔動(dòng)物(CL)要求在CV的基礎(chǔ)上,還須不帶有動(dòng)物傳染病的病原體。無特定病原體動(dòng)物(SPF)要求在CL基礎(chǔ)上還須不帶有干擾實(shí)驗(yàn)的微生物。無菌動(dòng)物(GF)要求不帶有任何用現(xiàn)有的方法可以檢出的微生物。悉生動(dòng)物(GN)要求在無菌動(dòng)物體上植入一種或數(shù)種已知的微生物。

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