醫(yī)院藥學(xué):第四十六章　滅菌法

一、概述

滅菌法是指殺死或除去所有微生物的方法，是滅菌藥劑生產(chǎn)的主要過(guò)程，對(duì)于注射劑尤為重要。微生物包括細(xì)菌、真菌、病毒等，凡有生命的地方都有微生物存在，微生物繁殖很快。細(xì)菌的芽胞具有較強(qiáng)的的抗熱力，不易殺死，因此滅菌效果，應(yīng)以殺死芽胞為標(biāo)準(zhǔn)。在藥劑中選擇滅菌方法，與微生物學(xué)上的要求不盡相同，不但要達(dá)到滅菌的目的，而且要保證藥物的穩(wěn)定性。

二、F與Fo值在滅菌中的意義與作用

近年來(lái)對(duì)滅菌過(guò)程無(wú)菌檢驗(yàn)中存在的問(wèn)題引起人們的注意。一方面滅菌溫度多系測(cè)量滅菌器內(nèi)的溫度不是滅菌物體內(nèi)的溫度，同時(shí)無(wú)菌檢驗(yàn)方法也在局限性。在檢品存在微量的微生物時(shí)，往往難以用現(xiàn)行的無(wú)菌檢驗(yàn)法檢出。因此，人們對(duì)認(rèn)識(shí)到對(duì)滅菌方法的可靠性進(jìn)行驗(yàn)證是很必要的。F（或F)值可作用驗(yàn)證滅菌可靠性的參數(shù)。

（一)微生物致死間曲線與D值 人們對(duì)微生物死亡的動(dòng)力學(xué)研究表明，其死亡速度屬一級(jí)過(guò)程，在一定溫度下符合下述方程（1－1式)：

式中N。為原始微生物數(shù)，Nt為殘存的微生物t時(shí)殘存的微生物。殘存數(shù)的對(duì)數(shù)時(shí)間作圖，得一條直線，直線的斜率＝K／2.303，K為速度常數(shù)，單位為時(shí)間。為了方便起見(jiàn)，引用D，并定義D為一定溫度下殺死被滅菌物品中微生物婁99％所需時(shí)間，上式可寫(xiě)成

根據(jù)D的定義，則

因此，D也可定義為降低微生物一個(gè)十位數(shù)（)或一個(gè)對(duì)數(shù)值（如log100降低到log10)所需的時(shí)間，如圖46－1所示。D值因微生物的種類、環(huán)境、滅菌溫度不同而各異（表46－1)。

（二)Z值一旦在不同溫度下對(duì)特定的微生物的在特定介質(zhì)或環(huán)境中求得D值后，就可用logD值對(duì)溫度作圖，在一定溫度范圍內(nèi)，logD與T呈直線關(guān)系，直線的斜率＝logD₂－logD₁／T₂－T₁。

由于此斜率為負(fù)值，為避免引入負(fù)數(shù)，而提出Z值的概念，Z＝T－T₁／logD₂－logD₁，故定義Z值為降低一個(gè)logD值需的溫度數(shù)，如圖46－2的單位為度，也可以認(rèn)為Z值是降低微生物數(shù)90％所需要的溫度數(shù)。表46－2是一些藥物溶液的Z值

圖46－1 logNt與t的關(guān)系圖

圖46－2 logD與T關(guān)系圖

表46－1 不同滅菌法不同微生物的D值bhskgw.cn/rencai/

表46－2 不同溶液以嗜熱脂肪芽孢村菌測(cè)定Z值

（三)F值與Fo值

1．F值F值的數(shù)學(xué)表達(dá)或可表示如下：

△t是測(cè)量被滅菌物溫度的時(shí)間間隔，一般為0.5－1.0或更小，T是每個(gè)△t測(cè)量被滅菌的溫度，To是參比溫度（reference temperature)。

按此表達(dá)式，F(xiàn)為在一定溫度（T)，給Z值所產(chǎn)生的滅菌效力與參比溫度（To)給定Z值所產(chǎn)生的滅菌效果相同時(shí)所相當(dāng)?shù)臅r(shí)間（equivalent time)以分為單位。例如干熱滅菌的參比溫度用170，消毀大腸桿菌內(nèi)毒素（endotoxin of E.Coli)的Z值為54℃，則采用250℃干熱滅菌消毀上述內(nèi)毒素的F值為750℃分。

根據(jù)式（1－1)，

若Nt確定為滅菌效果。同時(shí)D＝2.303／K，故也可將在一定溫度（T)下殺死容器中全部微手物所需的時(shí)bhskgw.cn/zhuyuan/間稱為F值，它等于D值與微生物數(shù)降低值的乘積，F(xiàn)值的意義就更明確了。

F＝DT×（log100－log10^－6)

2．Fo值為一定滅菌溫度（T)Z值為121℃，并假設(shè)特別耐濕熱的微生物指示劑（嗜熱脂肪芽胞桿菌)的Z值為10℃，則

顯然，F(xiàn)o值為一定滅菌溫度（T)Z值為10 ℃所產(chǎn)生的滅菌效果力相同時(shí)所相當(dāng)?shù)臅r(shí)間（分)。也就是說(shuō)Fo是將各種滅菌溫度使微生物的致死力轉(zhuǎn)換為滅菌物品完全暴露于121℃使微生物致死效力。

滅菌過(guò)程中，只需記錄被來(lái)菌物的溫度與時(shí)間，就可算出Fo，假設(shè)如下數(shù)據(jù)，△t取0.5分。

并假設(shè)4.0min以后，維持115℃30min不變，則

Fo還可以看作P（2)值與微生物的對(duì)數(shù)降低值的乘積。

Fo＝D₁₂₁×（logNo－logNt)

同樣，Nt為滅菌后希望達(dá)到微生物殘存數(shù)，一般取10^-6如將含有200個(gè)嗜熱脂肪芽胞桿菌的5％葡萄糖水溶液以121℃熱壓滅菌時(shí)殺死容器中全部微生物所需要的時(shí)間。

Fo值的計(jì)算對(duì)于驗(yàn)證滅菌效果極為有用，當(dāng)產(chǎn)品以121℃濕熱滅菌時(shí)，滅菌器內(nèi)的溫度雖能迅速升到121℃，而被菌物品內(nèi)部則不然，通過(guò)由于包裝材料性能及其他因素影響而使。升溫度各異，而Fo將隨著產(chǎn)品溫度（T)變化而呈指數(shù)的變化。故溫度即使很小的差別（如0.1-1),將對(duì)Fo值產(chǎn)生顯著的影響。同時(shí)要求測(cè)定滅菌物品內(nèi)的實(shí)際溫度，故用Fo來(lái)監(jiān)測(cè)難滅菌效果肯有重要的意義。由于Fo是將不同滅菌溫度折算到相當(dāng)于121℃濕熱滅菌時(shí)的效力，故Fo值可作為滅菌過(guò)程的比較參數(shù)。

為了使Fo測(cè)定準(zhǔn)確，先應(yīng)選擇靈敏度高，重現(xiàn)性好，精密度為0.1的熱電偶，并對(duì)熱電偶進(jìn)行校驗(yàn)。滅菌時(shí)應(yīng)將熱電偶的探針置于被測(cè)物的內(nèi)部，經(jīng)滅菌器通向柜外的濕度記錄儀，有些滅菌記錄儀（digistrip recolder)附有Fo計(jì)算器，在滅菌過(guò)程中和滅菌后，自動(dòng)顯示Fo值。

另外，還應(yīng)考慮一些其他因素對(duì)Fo值的影響，有人對(duì)溶液粘度，容器充填量及容器在滅菌器內(nèi)的數(shù)量與排布進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)Fo均有影響，而以后者影響最大。故要注意滅菌器內(nèi)各層、四角、中間位置熱分布是否均勻，并進(jìn)行實(shí)際測(cè)定，作出合理排布，以便測(cè)得Fo值更可靠。

為了確保滅菌效果，還應(yīng)注意兩個(gè)問(wèn)題，根據(jù)Fo＝D121×（logNo－logNt)，若N越大，即被滅菌物中微生物越多，則滅菌時(shí)間越長(zhǎng)，故生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)盡量減少微生物的污染，應(yīng)采取各種措施使每個(gè)容器的含菌數(shù)控制在10以下（即（log10≤1)。其次計(jì)算Fo時(shí)，應(yīng)適當(dāng)考慮增加安全因素，一般增加5％，如規(guī)定Fo為8分，則實(shí)際操作應(yīng)控制Fo12分為好。

三、物理滅菌法

（一)干熱滅菌法 一般認(rèn)為繁殖型細(xì)胞在100℃以上干熱1小時(shí)即被殺死。耐熱性細(xì)菌芽胞在120℃以下長(zhǎng)是時(shí)間加熱也不死亡，介140℃前后則殺菌效率急劇增長(zhǎng)。所以，關(guān)于干熱滅菌條件，有的藥典規(guī)定為180℃1小時(shí)以上，有的藥典規(guī)定為160－170℃2－4小時(shí)，此僅是大至的標(biāo)準(zhǔn)而已，必須通過(guò)實(shí)驗(yàn)，在保證滅菌完全同時(shí)對(duì)來(lái)菌物品無(wú)損害的前提下，制訂該物品的干熱來(lái)菌條件。時(shí)間必須由滅菌物品全部達(dá)到特定溫度的計(jì)算。此法適用于耐高溫的玻璃制品、金屬制品以及不允許濕氣透的油脂類和耐高溫的粉末化學(xué)藥品等。熱原經(jīng)250℃30分鐘，或200℃以上高溫至少45分鐘，可遭破壞。消毀大腸桿菌內(nèi)毒素，250℃時(shí)F值為750分，210℃時(shí)F值為1950分。本法缺點(diǎn)是穿透力弱，溫度不易均勻，而且由于滅菌溫度過(guò)高，不適用橡膠、塑料及大部分藥品。

（二)濕熱滅菌法 濕熱滅菌法，由于蒸氣比熱大，穿透力強(qiáng)，容易使蛋白變性，同時(shí)還有作用可靠，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，所以是制劑生產(chǎn)中應(yīng)用最廣泛的一種滅菌方法，本法包括熱壓滅菌法，流通蒸氣滅菌法和低溫間歇滅菌等方法。根據(jù)藥品性質(zhì)進(jìn)行選用。

1．熱壓滅菌法 本法一般公認(rèn)為最可靠的濕熱滅菌法。應(yīng)用大于常壓的水蒸氣如1kg/cm²熱壓蒸氣以15－20分鐘，能殺滅所有細(xì)菌增殖體和芽胞。熱壓滅菌所需的溫度及與溫度相當(dāng)?shù)膲毫�及時(shí)間如下115.5℃1.7氣壓（表壓力0.71kg/cm²)30分鐘；121.5℃2.0氣壓（表壓力11kg/cm²)20分鐘；126.5℃2.4氣壓（表壓力1.41kg/cm²)15分鐘。濕熱滅菌一般要求Fo＝1－12分。

熱壓滅菌用的滅菌器種類很多，但其基本結(jié)構(gòu)大同不異。熱壓滅菌器密閉耐壓，有排氣口安全閥，壓力表和溫度計(jì)等部件。有的通蒸氣加熱，有的用煤氣、電熱或木炭等加熱。常用的有手提式熱壓滅茵器等。

臥式熱壓滅菌柜，是一種大型滅菌器，全部用堅(jiān)固的合金制成，帶有夾套的滅菌柜內(nèi)備有帶軌道的格車，分為若干格。滅菌柜頂部裝有壓力表兩只，一只指示蒸氣夾套內(nèi)的壓力，另一只指示柜內(nèi)室的壓力。兩壓力表的中間為溫度表，滅菌柜底部裝有排氣口，在排氣管上裝有溫度探頭，以導(dǎo)線與溫度相聯(lián)。國(guó)內(nèi)現(xiàn)已經(jīng)生產(chǎn)一種有冷卻水噴淋裝置，滅菌溫度與時(shí)間采用程序控制的新型熱壓滅菌器。

熱壓滅菌器使用時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題：

（1)滅菌器的構(gòu)造、被來(lái)菌物體積、數(shù)量、排布均對(duì)滅菌的濕度有一定影響，故應(yīng)先進(jìn)行滅菌條件實(shí)驗(yàn)，確保滅菌效果。

（2)必須將滅菌器內(nèi)的空氣排出。如果滅菌器內(nèi)的空氣存在，則壓力表上所表示的壓力是器內(nèi)蒸氣和空氣二者的總壓而非單純的蒸氣壓力。結(jié)果壓力雖然到達(dá)預(yù)定的水平，但溫度達(dá)不到。若表指示一致。則有可能空氣沒(méi)有排盡，也可能壓力表失靈，也可能不是飽和蒸氣，應(yīng)找出原因，加以解決。由于水蒸氣被空氣稀釋，妨礙了水蒸氣與滅菌物品的充分接觸，而降低了水蒸氣的滅菌效果。附有真空裝置的熱壓滅菌器，在通入蒸氣前將順內(nèi)空氣抽出，可加快預(yù)熱過(guò)程，縮短滅菌時(shí)間。減壓還可有效地將多孔性物質(zhì)中空氣驅(qū)除，有利于水蒸氣的穿透，同時(shí)滅菌器內(nèi)溫度均勻。

（3)滅菌時(shí)間必須由全部藥液溫度直正達(dá)到所要求的溫度時(shí)算起，在開(kāi)始升溫時(shí)，要求一定的預(yù)熱時(shí)間，例如250－500ml輸液瓶，預(yù)熱時(shí)間為15－30分鐘。一般滅菌器上，均裝有壓力表和溫度計(jì)，但通常是測(cè)定滅菌器內(nèi)的溫度，百不是被滅菌物內(nèi)的溫度，因此最限能設(shè)計(jì)直接測(cè)定被滅菌物內(nèi)溫度的裝置。同時(shí)為了確保滅菌溫度，在生產(chǎn)上常使用溫度批示劑例如利用某些熔點(diǎn)正好是滅菌所需溫度的化學(xué)藥品作指示，以判斷滅菌濕度是否達(dá)到。方法是將少量的藥物封裝于安瓿內(nèi)，與滅菌物一起放入滅菌器的上下部位滅菌，滅菌后觀察藥品是否熔化。常用化學(xué)藥品指示劑有升華硫（115℃)、安替匹林（110－120℃)、碘仿（115℃)、氯基比林（107－109℃)、苯甲酸（121℃)等，并可加著色劑如亞甲藍(lán)、甲紫等以便于觀察。但此類指示劑并洋能表明保持該濕度的確切時(shí)間。將耐熱的芽胞封裝于安瓿內(nèi)浸透于干紙條中,制成生物性指示劑，廣泛地地試驗(yàn)滅菌設(shè)備及方法。但用于藥劑的常規(guī)生產(chǎn)中，應(yīng)使用非致病性、有抵抗力、不產(chǎn)生熱原的菌種，如B.Stearothermophilus此外，國(guó)內(nèi)現(xiàn)已采用滅菌溫度和時(shí)間自動(dòng)控制記錄的裝置。

（4)滅菌完畢后，停止加熱，一般必須使壓力表所指示的壓力逐漸下降到零，才能放出鍋內(nèi)蒸氣，使鍋內(nèi)壓力與大氣壓相等后，稍稍打開(kāi)滅菌鍋待10－15分鐘，再全部打開(kāi)。這樣可避免內(nèi)外壓力差太大而使物品沖出鍋外和使玻璃瓶炸裂。這點(diǎn)必須注意，以免發(fā)生工傷事故。為了縮短滅菌周期，也有對(duì)滅菌器內(nèi)盛有溶液的容器噴霧水冷卻,以加速冷卻。實(shí)驗(yàn)表明對(duì)于經(jīng)過(guò)0.70熱壓滅菌的200個(gè)／升的瓶子，用水溫度18℃霧滴大小為80進(jìn)行噴霧時(shí)，冷卻效果最大，過(guò)冷粗的噴霧將引起瓶子的爆破，或用逐漸降溫的噴霧水冷卻。對(duì)于滅菌后要求干燥但又不易破損的物料，滅菌后立即放出滅菌器內(nèi)的蒸氣，以利干燥。

2．流通蒸氣滅菌和煮沸滅菌法 流通蒸氣滅菌是不密閉的容器內(nèi)，用蒸氣滅菌。壓力與大氣壓相等。即100℃的蒸氣滅菌。目前我國(guó)藥廠生產(chǎn)注射劑，特別是1－2的注射劑及不耐高熱的品種，可考慮采用這種滅菌法。煮沸滅菌法就是把安瓿或其他物品放入水中煮沸滅菌。流通氣滅菌與煮沸滅菌，一般是100℃30分鐘或60分鐘。此法不能保證殺滅所有的芽胞，例如破傷風(fēng)等厭氣性菌的芽胞，故制備過(guò)程中要盡可能避免污染，這點(diǎn)必須充分注意。

3．低溫間歇滅菌法 此法是將待滅菌的制劑或藥品，用60－80℃加熱1小時(shí)，將其中的細(xì)菌繁殖體殺死，然后在室溫或孵卵箱中放置24小時(shí)，讓其中的芽胞發(fā)育成為繁殖體，再二次加熱將其消滅為止。加熱和放置需連續(xù)操作三次以上，至全部芽胞消滅為止。此法適用于必須用熱法滅菌但又不耐較高溫度的制劑或藥品。本法的缺點(diǎn)，不僅需要時(shí)間長(zhǎng)，并且消滅芽胞的效果常不夠完全，應(yīng)用本法滅菌的制劑或藥品，除本身具有抑制力者外，須加適量抑菌劑，以增加滅菌效力

4．影響濕熱滅菌的因素

（1)微生物的種類和數(shù)量：各細(xì)菌對(duì)熱的抵抗力相差很大，處于不同發(fā)育階段，所需滅菌的濕度與時(shí)間也不相同，繁殖期的微生物對(duì)高溫比衰老時(shí)期的抵抗力小得多。前面已經(jīng)指出，每個(gè)容器的細(xì)菌數(shù)，控制在10個(gè)以內(nèi)為宜。最初菌數(shù)愈少，達(dá)到滅菌時(shí)間愈短。同時(shí)，最初菌數(shù)增多也增加了耐熱個(gè)體出現(xiàn)的幾率。即使細(xì)菌全部殺滅，而注射液中細(xì)菌體過(guò)多，亦會(huì)引起臨床上的不良反應(yīng)，所以整個(gè)性產(chǎn)過(guò)過(guò)程應(yīng)盡可能避免微生物污染，盡可能縮短生產(chǎn)過(guò)程，并力求在灌封后立即菌。

（2)注射液的性質(zhì):注射液若含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),如糖類,蛋白質(zhì)等,對(duì)微生物可能有一種保護(hù)作用,能增強(qiáng)其抗熱性。此外，藥液pH對(duì)細(xì)菌的活性也有影響。一般微生物在中性液中耐熱性最大，在堿性溶液中次之；酸性不利于微生物的發(fā)育。所以，一般在生物堿鹽類的注射液，因ph 較低，用流通蒸氣滅菌即可。加有適當(dāng)抑菌劑時(shí)，藥液經(jīng)100℃30分鐘加熱，可殺死抵力強(qiáng)芽胞。有些藥典采用此種滅菌方法所用的抑菌劑為甲酚（0.1－0.3%)、氯甲酚（0.05％－0.1%)、苯酚（0.1％－0.5%)、三氯叔丁醇（0.2％－0.5%)、硝酸苯汞或醋酸苯汞（0.001％－0.002%)。

（3)藥物的穩(wěn)定性：

溫度增高，化學(xué)反應(yīng)速度增加：時(shí)間愈長(zhǎng)，起反應(yīng)的物質(zhì)愈多。因此，不能只看到滅菌殺死細(xì)菌的一面，也要看到保證藥物有效性的一面。為此在能達(dá)到滅菌的前提下，可適當(dāng)降低濕度或縮短時(shí)間。實(shí)踐證明在力求避免微生物污染和嚴(yán)格質(zhì)量控制的條件下，維生素C注射液用流通蒸氣15分鐘滅菌，氯化鈉注射注用115℃30分鐘是可行的。

（三)紫外線滅菌法 一般用于滅菌的紫外線波長(zhǎng)是200－300nm，滅菌力最強(qiáng)的是波長(zhǎng)為254nm4的紫外線。紫外線進(jìn)行直線傳播，其強(qiáng)度與距離平方成比例地減弱，并可被不同的表面反射。其穿透作用微弱，但較易穿透清潔空氣及純凈的水，其中懸浮物或水中鹽類增多時(shí)，則穿透程度顯著下降。所以紫外線廣泛作空氣滅菌和表面滅菌之用。一般在6－15m³的空間可裝置30瓦（或36－48)紫外線燈一只，燈距離地面以2.5m到3m為宜。濕度過(guò)大可降低滅菌效果，相對(duì)濕度以45％－60％比較適宜。濕度宜于10－55℃范圍。紫外線燈管秘須保證無(wú)塵油垢，否則輻射強(qiáng)度將大力為降低。普通玻璃可吸收紫外線。因此安瓿中藥物不能用此法滅菌。

紫外線的殺菌效率，還取決于微生物的敏感性。如于一平面上輻射強(qiáng)度為通常應(yīng)用的最小強(qiáng)度2mw/cm²(30瓦紫外線燈于距1米處強(qiáng)度為85mw/cm²)時(shí)殺死枯草桿菌芽胞需1100秒，而對(duì)溶血性鏈球菌，則僅需275秒�？纱致哉J(rèn)為在紫外線燈下直接暴露，一般繁殖型微生物約3－5分鐘，芽胞約10分鐘即可死亡。唯紫外線對(duì)酵母特別是霉菌殺菌力較弱。紫外線對(duì)人體如照射過(guò)久，能產(chǎn)生結(jié)合膜炎及皮膚燒灼等現(xiàn)象。一般均在操作前啟紫外線燈約半小時(shí)至一小時(shí)，然后進(jìn)行操作。各種規(guī)格的紫外線燈，皆規(guī)定了有效使用時(shí)即，一般為3，000小時(shí)。故每次使用應(yīng)登記開(kāi)啟時(shí)間，并定期進(jìn)行來(lái)菌效果的檢查，也可用具有對(duì)254nm靈敏的照度計(jì)，來(lái)測(cè)定其輻射強(qiáng)度。

（四)過(guò)濾除菌法 過(guò)濾除菌法，是使藥物溶液通過(guò)無(wú)菌的特定濾器，除去活的或死的微生物而得到不含微生物的濾液。適于很不耐熱的藥液的滅菌。供來(lái)菌用的濾器。要球能有效地從溶液中除凈微生物，溶液順暢地由濾器通過(guò)，濾液中不落入任何所不需要的物質(zhì)，濾器容易清洗，操作簡(jiǎn)便。

繁殖型細(xì)菌很少有小于1μm者，芽胞大小為0.5μm或更小些，所以，對(duì)于以過(guò)篩作用濾過(guò)的濾器，例如纖維素酯膜濾器。其孔徑大秘須小到足以阻止細(xì)胞和芽進(jìn)入濾孔之內(nèi)，大約為0.2μm�？孔枇粲诳椎乐畠�(nèi)或靜電作用的濾器，孔徑可稍大于所要濾除的顆粒，但如壓力過(guò)大或波動(dòng)，顆粒有被擠過(guò)的可能。濾孔徑要進(jìn)行檢查，最常用測(cè)定孔徑的方法，是用大小為0.7μm左右的靈菌（Bprodigiosus)混懸液濾過(guò)，濾液通過(guò)培養(yǎng)試驗(yàn)，觀察有無(wú)靈菌濾過(guò)。

近年來(lái)廣泛采用微孔薄膜作滅菌濾器，膜濾器的性能詳見(jiàn)注射劑一章濾器的種類與選擇項(xiàng)下，作滅菌過(guò)濾一般選用孔徑0.22μm的濾膜。G6號(hào)垂熔玻璃漏斗，其濾孔直徑在2μm以下，可以除去細(xì)菌，對(duì)藥物不吸附，也不影響藥液的pH，常滅菌濾器。此外孔徑0.8-1.8μm的石棉板濾器孔徑1.5-1.7μm的白陶土濾柱，也可作濾過(guò)細(xì)菌用，但由于它們存在一些缺點(diǎn)，所以實(shí)際使用不多。

（五)輻射滅菌法 輻射滅菌是應(yīng)用γ射線殺菌的方法。γ射線通�？捎煞派湫酝�位素如Co⁶⁰產(chǎn)生。輻射滅菌的特點(diǎn)是可不升高的產(chǎn)品的溫度，特點(diǎn)用于某些不耐熱的滅菌，穿透性強(qiáng)，γ射線適用于較厚樣品的滅菌，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于某些物質(zhì)如維生素類、抗菌素、激素、肝素、羊腸線、醫(yī)療器械等物質(zhì)的滅菌。包裝的產(chǎn)品也可滅菌而大大減少了污染的機(jī)會(huì)。滅菌劑量一般用2.5兆拉得（Megarad)，此法，已為《英國(guó)藥典》（1969)日本藥典Ⅸ所收載。

輻射滅菌，設(shè)備費(fèi)用高，某些藥品經(jīng)輻射滅菌后，有可能效力降低，產(chǎn)生毒性物質(zhì)或發(fā)熱性物質(zhì)，且溶液不如固體穩(wěn)定，同時(shí)要注意全防護(hù)問(wèn)題。

（六)微波滅菌法、高速風(fēng)滅菌法 通常所謂微波，是指頻率在300兆赫到300千兆赫之間的電磁波。水可強(qiáng)烈地吸收微波，使極性分子轉(zhuǎn)動(dòng)，由于分子間的摩擦而生熱。熱是在被加熱的物質(zhì)內(nèi)產(chǎn)生的，所以加熱很均勻，并且升溫迅速。同時(shí)，由于微波可穿透介質(zhì)較深，所以在一般情況下，可以作到表里一致地均勻加熱。微波所以用于水性注射的滅菌，主要是由于其產(chǎn)生熱效應(yīng)的緣故。

微波滅菌法含菌量高達(dá)350萬(wàn)個(gè)大腸桿菌的生理鹽水混懸液，密封在1－2ml的安瓿中，經(jīng)3－5千瓦功率，2450兆赫的微波作用15秒鐘以上，安瓿溫度接近110℃左右時(shí)，可將細(xì)胞細(xì)菌全部殺滅。金黃色葡萄球菌與此結(jié)果近似，枯草桿菌芽胞，含量為6萬(wàn)－8萬(wàn)個(gè)時(shí)，液溫必須達(dá)到140℃，保持20秒鐘以上。才能徹底殺滅，含2，000－3，000個(gè)青菌胞子的生理鹽水混懸液，在3－4千瓦微波功率作用下，液溫達(dá)到120℃以上，經(jīng)20－25秒鐘，即徹底殺滅。經(jīng)過(guò)微波滅菌后的安痛定、維生素、維生素C、速尿、慶大霉素、卡那霉素注射液。除維生素C的溶液色澤有部分變黃外，其他五種的色澤、pH和主要成份含量都無(wú)明顯變化。宇野等還比較了微波滅菌與高蒸氣滅菌對(duì)17種化學(xué)藥物穩(wěn)定的影響，認(rèn)為對(duì)高壓蒸氣滅菌穩(wěn)定的藥物，使用微波滅菌時(shí)無(wú)變化，而對(duì)高壓蒸氣滅菌不穩(wěn)定的藥物如維生素C，阿司匹林等用微波滅菌，則比較穩(wěn)定，其分解程度降低。此法由于存在破損率高，滅菌不完全及勞動(dòng)保護(hù)等問(wèn)題，還有待進(jìn)一步研究。

高速風(fēng)滅菌法，應(yīng)用的風(fēng)速為30－80m／秒，風(fēng)溫度高為190℃，由于降低了安瓿周圍的滯流層的厚度，使安瓿內(nèi)液體迅速升溫。2ml的安瓿注射液應(yīng)用此法，能于3分外的短時(shí)間內(nèi)升高至140℃，對(duì)于耐熱性高的嗜熱脂肪芽胞桿菌，液溫度達(dá)到130℃以上，就呈現(xiàn)顯著滅菌效果。與熱壓蒸氣滅菌法比較，不但具不同等以上的滅菌效果，并使注射液變質(zhì)較少。因此，作者認(rèn)為高速熱風(fēng)菌法，對(duì)于小容量安瓿注射液的滅菌極為不利。

此外還有超音波滅菌法，僅用于疫苗制品。

四、化學(xué)滅菌法

本法是指用化學(xué)藥品直接作用于微生物而將其殺死，同時(shí)不應(yīng)損害制品的質(zhì)量，常用的方法有：

（一)氣體滅菌法 制藥工業(yè)上用于菌的氣體，多用環(huán)氧乙烷。環(huán)氧乙烷的分子式為：

，沸點(diǎn)為10.9℃，室溫下氣，在水中溶解度很大，1ml水中可溶195ml（20℃，760mmHg)，易穿透塑料，紙板及固體粉末，暴露于空氣中環(huán)氧乙烷就可從這些物質(zhì)消散，環(huán)氧乙烷對(duì)大多數(shù)固體呈惰性。環(huán)氧乙烷的殺菌作用，由于其為烷化劑的性質(zhì)，使菌體蛋白的-COOH，-NH₂，-SH，-OH，的H，被-CH₂-CH₂-OH所換�？捎靡詼缇�塑料容器，對(duì)熱敏感的固體藥物，紙或塑料包裝的藥物，橡膠制品、注射筒,注射針頭，衣著敷料及器械等。但是，一些塑料、皮革及橡膠與環(huán)氧乙烷有強(qiáng)親和力，故需長(zhǎng)達(dá)12－24小時(shí)通空氣驅(qū)除。我國(guó)曾用環(huán)氧乙烷對(duì)芐霉素普魯卡因進(jìn)行滅菌，效果良好。

環(huán)氧乙烷具可燃性，當(dāng)與空氣混合，空氣含量達(dá)3.0%（v/v)時(shí)即可爆炸。故應(yīng)用時(shí)需用惰性氣體二氧化碳或氟利昂稀釋。環(huán)氧乙烷的吸入毒性較大與氨相近，無(wú)氨樣的剌激嗅味，損害皮膚及眼粘膜，可產(chǎn)生水泡或結(jié)膜炎，故應(yīng)用時(shí)要注意。

用環(huán)氧乙烷來(lái)菌的程序，大致為將滅菌物品置于滅菌器內(nèi)后，減壓排除空氣，預(yù)熱，環(huán)氧乙烷采用混合氣，一般用環(huán)氧乙烷12％氟利昂88％或用環(huán)氧乙烷10％二氧化碳90％，在減下輸入混合氣，保持一定濃度、濕度、及溫度，以過(guò)一定時(shí)間后，抽真空排除環(huán)氧乙烷，然后送入無(wú)菌空氣完全排除環(huán)氧乙烷的濃度為850－900mg/L（3小時(shí)、45℃)45mg/L（5小時(shí)，45℃)，相對(duì)濕度以40％－60％為宜濕度為22－55℃。

在藥劑工作中，也常利用一些化學(xué)藥劑的蒸氣熏蒸，進(jìn)行操作室內(nèi)的滅菌。甲醛溶液加熱熏蒸，每立方米空間用40％甲醛溶液30m1室內(nèi)相對(duì)濕度宜高，以增進(jìn)甲醛氣體滅菌效果。甲醛對(duì)粘膜有強(qiáng)性激性，滅菌后剩余的甲醛氣體可排除或通入氨予以吸收。亦有采用丙二醇作室內(nèi)空氣滅菌者，丙二醇具有不揮發(fā)性和無(wú)引火性等特點(diǎn)，滅菌用量為1ml/m³，將丙二醇置蒸發(fā)器中加熱，使蒸氣彌漫全室。也有用乳酸蒸氣滅菌者用量為2ml/m³，殺菌力雖不及甲醛，但對(duì)人無(wú)害，此外，還有使用三甘醇（Triethyeneglyool HO-(CH₂)₂-O-(Ch₂)₂-O-(Ch₂)₂-OH)的，三甘醇是無(wú)色粘稠液體，沸點(diǎn)285℃，溶于水使用方法與丙二醇同，也有報(bào)導(dǎo)，過(guò)酣酸用于車間的室內(nèi)菌，效力比相同濃度的甲醛大兩倍半，對(duì)粘膜，眼部無(wú)剌激性，對(duì)木制品、金屬制品、醫(yī)療器械均無(wú)影響。

（二)應(yīng)用化學(xué)殺菌劑 在制劑工業(yè)上應(yīng)用化學(xué)殺菌劑，其目的在于減少微生物的數(shù)目，以控制無(wú)菌狀況至一定水平�；瘜W(xué)殺菌劑并不能殺死芽胞，僅對(duì)繁殖體有效。化學(xué)殺菌劑的效果，依賴于微生物的種類及數(shù)目，物體表面光滑或多孔與否，以及化學(xué)殺菌劑的性質(zhì)。常用的有0.1％－0.2％新潔而來(lái)溶液，2％左右的酚或煤酚皂溶液75％酒精等。由于化學(xué)殺菌劑常施用于物體表面，也要注意其濃度不要過(guò)高，以防其化學(xué)腐蝕作用。

五、無(wú)菌操作法

無(wú)菌操作法在技術(shù)上并非滅菌操作，因其與滅菌操作有密切聯(lián)系，而于本節(jié)內(nèi)討論。

無(wú)菌操作法，是整個(gè)過(guò)程控制在無(wú)菌條件下進(jìn)行的一種操作方法。某些藥品加熱滅菌后發(fā)生變質(zhì)、變色或降低含量者可采用無(wú)菌操作法制備。此種無(wú)菌操作，不僅用于注射劑而且對(duì)其它的如滴眼劑、海棉劑等用于粘膜和創(chuàng)傷的制劑也均適用。無(wú)菌操作室或無(wú)菌操作所用的一切用具、材料以及環(huán)境，均須應(yīng)用面所述滅菌法滅菌，操作須在無(wú)菌操作室或無(wú)操作柜內(nèi)進(jìn)行。

（一)無(wú)菌操作的空氣滅菌可應(yīng)用上節(jié)《氣體滅菌法》中所述的甲醛、丙二醇、乳酸、三甘醇等。其具體用法不再贅述。藥廠大型無(wú)菌操作，常用甲醛溶液加熱熏蒸進(jìn)行空氣滅菌。將甲醛溶液放入瓶?jī)?nèi)，逐漸被吸收蒸氣夾層加熱鍋中，甲醛溶液被加熱，甲醛蒸氣經(jīng)氣出口送入總進(jìn)風(fēng)道，由鼓風(fēng)機(jī)吹入無(wú)菌操作室，連續(xù)3小時(shí)后，一般即可將鼓風(fēng)機(jī)關(guān)閉。室溫應(yīng)保持25℃以上，以免室溫過(guò)低甲醛蒸氯了聚合而附著于冷表面，濕度應(yīng)保持60％以上，密閉熏蒸12－24小時(shí)以后，再將25％氨水加熱（每m³用8－10ml)，從總風(fēng)道送入氨氣約15分鐘，以吸收甲醛蒸氣，然后開(kāi)啟總出口排風(fēng)，并通入經(jīng)處理過(guò)的無(wú)菌空氣直到室內(nèi)無(wú)臭氣為止。

除用上述方法定期進(jìn)行較徹底的滅菌外，還要對(duì)室內(nèi)的空間、用具（桌椅等)、地面、墻壁等，用3％酚溶液、2％煤酚皂溶液、0.2%新潔而或75％酒精噴灑或擦試。其它用具盡量用熱壓滅菌法或干熱滅菌法滅菌。每天工作前開(kāi)啟外線一小時(shí)，中午休息時(shí)間也要開(kāi)1／2－1小時(shí)。

（二)無(wú)菌操作 操作人員進(jìn)入操作之前要洗澡并換上已經(jīng)滅菌的工作服和清潔的鞋子，不使頭發(fā)、內(nèi)衣等露出來(lái)，以免造成污染機(jī)會(huì)。安瓿要150－180℃2－3小時(shí)干熱滅菌。橡皮塞要以121℃1小時(shí)熱壓滅菌。有關(guān)器具、機(jī)器都要經(jīng)過(guò)滅菌。用無(wú)菌操作法制備的注射劑，大多要加入抑制。

小量無(wú)菌制劑的制備，也可在無(wú)菌操作柜中進(jìn)行。無(wú)菌操作柜分小型無(wú)菌操作與聯(lián)合無(wú)菌無(wú)操作兩種小型無(wú)菌操作柜又稱單人無(wú)菌柜。式樣有單面式與雙面式兩種。操作柜的架子用木制，四周配以玻璃，前面操作下裝木板，挖二圓孔，孔內(nèi)密接橡皮手套或袖套。藥品及用具等，由側(cè)門(mén)送入柜內(nèi)后關(guān)閉。操作時(shí)可完全與外界空氣隔絕。柜內(nèi)空氣的滅菌，可在柜中央上方裝一小型紫外線燈，使用前1小時(shí)啟燈滅菌，或用藥液（如3％酚溶液)噴霧滅菌。聯(lián)合無(wú)菌操作柜是由幾個(gè)小型操作柜聯(lián)合制成，以使原料的精制，傳遞分裝及成品暫時(shí)存放等工作全部在柜內(nèi)進(jìn)行。近年來(lái)，采用層流潔凈工作臺(tái)作無(wú)菌操作，使用方便，效果可靠。

六、無(wú)菌檢查法

藥劑或藥品經(jīng)滅菌或無(wú)菌操作法處理后，需經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)證實(shí)已無(wú)微生物生存，方能作用。

法定的無(wú)菌檢查法，包括有試管接種法和薄膜過(guò)濾法，其具體操作方法以及在一些特殊情況下的變動(dòng)，可詳見(jiàn)《中國(guó)藥典》附錄中的無(wú)菌檢查法。薄膜過(guò)濾用于無(wú)菌檢查的突出優(yōu)點(diǎn)，在于可濾過(guò)較大量的樣品可濾除抑菌性物質(zhì)，濾過(guò)后的薄膜，即可直接接種于培養(yǎng)基管中，或直接用顯微鏡觀察，故此法靈敏度高，不易產(chǎn)生假陰性結(jié)果，檢測(cè)次數(shù)減少，節(jié)省培養(yǎng)基，操作比較簡(jiǎn)單。