1 試劑
1.1標(biāo)準(zhǔn)抗毒素
由中國藥品生物制品檢定所按期分發(fā)，所標(biāo)單位應(yīng)與國際單位等值。標(biāo)準(zhǔn)抗毒素應(yīng)保存于2～8℃。
1.2毒素
由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)。亦可自備，但應(yīng)選經(jīng)保存一年以上，毒力適宜的毒素。其制法（包括菌種、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件等)應(yīng)與中國藥品生物制品檢定所分發(fā)者相同。試驗(yàn)用的毒素須以檢定所分發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)抗毒素準(zhǔn)確標(biāo)定其試驗(yàn)量（Lr/300)，并每3個(gè)月復(fù)檢1次。毒素應(yīng)保存于2～8℃暗處，并加入bhskgw.cn/rencai/甲苯或其他適宜防腐劑。
1.3稀釋液
硼酸鹽緩沖鹽水，滅菌后pH值應(yīng)為7.0～7.4。配方為：
氯化鈉8.5g
硼酸4.5g
硼砂0.5g
加蒸餾水至1000ml，過濾。
2 用具
吸管、容量瓶、注射器應(yīng)經(jīng)標(biāo)化（用雙蒸餾水稱量法或其他準(zhǔn)確方法)。吸管、試管、容量瓶應(yīng)潔凈干燥，注射器及針頭應(yīng)煮沸消毒。
3 試驗(yàn)動物
用體重2～3kg的健康白皮膚家兔，試驗(yàn)前一日用適宜方法進(jìn)行背部脫毛，凡皮膚有發(fā)炎或大量斑點(diǎn)現(xiàn)象者不應(yīng)使用。
4 試驗(yàn)方法
4.1標(biāo)準(zhǔn)抗毒素之稀釋
用稀釋液稀釋標(biāo)準(zhǔn)抗毒素，使每ml含IU/15（即20個(gè)IU/300)，即與毒素等量混合后每0.1ml注射量中含IU/300。標(biāo)準(zhǔn)抗毒素原液的一次吸取量不應(yīng)少于0.5ml。
4.2毒素之稀釋
用稀釋液稀釋毒素，使每ml含20個(gè)試驗(yàn)量（Lr/300)，即與抗毒素等量混合后每0.1ml注射量中含1個(gè)試驗(yàn)量（Lr/300)
4.3待檢抗毒素之稀釋
用稀釋液將待檢抗毒素稀釋成數(shù)個(gè)稀釋度，使每ml約含IU/15（即20個(gè)IU/300)或其上下，即與毒素等量混合后每0.1ml注射量中約含IU/300或其上下。稀釋度之間隔約為5～10%。
4.4混合
定量吸取已稀釋的標(biāo)準(zhǔn)抗毒素及不同稀釋度之待檢抗毒素分別裝入小試管中，每管加入等量之稀釋毒素，混合均勻，加塞，37℃結(jié)合1小時(shí)，立即注射。
混合時(shí)，吸取標(biāo)準(zhǔn)抗毒素，待檢抗毒素及毒素的吸管不得混用（若不得不用同1支吸管混合待檢抗毒素，則應(yīng)由高稀釋度向低稀釋度依次吸取混合。每當(dāng)更換1稀釋度之前須將吸管內(nèi)的剩余液吹凈，將吸管外部所沾殘液拭凈，吸取下1稀釋度液到前次吸取的最高處，廢棄之，再于該管內(nèi)連續(xù)吸吹3次。但1支吸管只得用于1份樣品)。
4.5注射
每份樣品注射2只家兔，每只家兔不能超過4份樣品。每稀釋度注射0.1ml于家兔皮內(nèi)（應(yīng)在近背脊兩側(cè))。每只家兔至少應(yīng)包括3個(gè)不同注射部位（前、中、后)的對照試驗(yàn)。
4.6觀察
試驗(yàn)家兔于注射后48及72小時(shí)各觀察1次，并測量反應(yīng)面積。
4.7結(jié)果判定
4.7.1以48～72小時(shí)結(jié)果作最后判bhskgw.cn/shouyi/定。注射對照部位一般于48～72小時(shí)內(nèi)輕度發(fā)紅，其直徑應(yīng)為10～14mm。待檢抗毒素之效價(jià)應(yīng)以與多數(shù)對照的反應(yīng)強(qiáng)度相同之最高稀釋度判定之，但反應(yīng)強(qiáng)度不得超過對照。
4.7.2有下列情況之一者應(yīng)予重試：
（1)對照反應(yīng)不合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。
（2)待檢抗毒素的稀釋度過高或過低。
（3)反應(yīng)不規(guī)則。
