1 試劑
1.1標(biāo)準(zhǔn)抗毒素
由中國(guó)藥品生物制品檢定所按期分發(fā)，所標(biāo)單位應(yīng)與國(guó)際單位等值。標(biāo)準(zhǔn)抗毒素應(yīng)保存于2～8℃。
1.www.med126.com2毒素
由中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)。試驗(yàn)用的毒素須以檢定所分發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)抗毒素準(zhǔn)確標(biāo)定其試驗(yàn)量（L+/10)，并每3個(gè)月復(fù)檢1次。使用干燥毒素時(shí)，須以精確的分析天平稱取，每次稱取量不得少于10mg。溶解后應(yīng)一次用完。余存之干燥毒素應(yīng)封存于裝有干燥劑之真空器皿中。亦可用干燥毒素制成液體甘油毒素，即干燥毒素生理鹽水溶解液與中性甘油（經(jīng)116℃10分鐘高壓蒸汽滅菌)等量混合，每ml至少含20個(gè)試驗(yàn)量。毒素應(yīng)保存于2～8℃暗處。
1.3稀釋液
硼酸鹽緩沖鹽水，滅菌后pH值應(yīng)為7.0～7.4。配方為：
氯化鈉8.5g
硼酸4.5g
硼砂0.5g
加蒸餾水至1000ml，過濾。
2 用具
吸管容量瓶注射器應(yīng)經(jīng)標(biāo)化（用雙蒸餾水稱量法或其他準(zhǔn)確方法)。吸管、試管、容量瓶應(yīng)潔凈干燥，注射器及針頭應(yīng)煮沸消毒。
3 試驗(yàn)動(dòng)物
用體重17～19g健康小白鼠。
4 試驗(yàn)方法
4.1標(biāo)準(zhǔn)抗毒素之稀釋
用稀釋液稀釋標(biāo)準(zhǔn)抗毒素，使每ml含0.5IU（即5個(gè)IU/10)；即與毒素等量混合后每0.4ml注射量中含IU/10。標(biāo)準(zhǔn)抗毒素原液的一次吸取量不應(yīng)少于0.5ml。
4.2毒素之稀釋
用稀釋液稀釋毒素，使每ml含5個(gè)試驗(yàn)量（L+/10)，即與抗毒素等量混合后每0.4bhskgw.cn/Article/ml注射量中含1個(gè)試驗(yàn)量（L+/10)。
4.3待檢抗毒素之稀釋
用稀釋液將待檢抗毒素稀釋成數(shù)個(gè)稀釋度，使每ml約含0.5IU（即5個(gè)IU/10)或其上下，即與毒素等量混合后每0.4ml注射量中約含IU/10或其上下。稀釋度之間隔約為5%。
4.4混合
定量吸取已稀釋之標(biāo)準(zhǔn)抗毒素及不同稀釋度之待檢抗毒素分別裝入小試管中，每管加入等量之稀釋試驗(yàn)毒素，混合均勻，加塞，37℃結(jié)合1小時(shí)，立即注射。
混合時(shí)，吸取標(biāo)準(zhǔn)抗毒素、待檢抗毒素及毒素的吸管不得混用（若不得不用同1支吸管混合待檢抗毒素，則應(yīng)由高稀釋度向低稀釋度依次吸取混合，每當(dāng)更換1稀釋度之前須將吸管內(nèi)的剩余液吹凈，將吸管外部所沾殘液拭凈，吸取下1稀釋度液到前次吸取的最高處，廢棄之，再于該管內(nèi)連續(xù)吸吹3次。但1支吸管只得用于1份樣品)。
4.5注射
注射0.4ml于小白鼠腹部或大腿根部皮下，應(yīng)注意勿使注射液流出，對(duì)照及待檢抗毒素之每個(gè)稀釋度各注射小白鼠至少3只。對(duì)照與待檢抗毒素不得用同1支注射器注射。待檢抗毒素1份樣品可用同1支注射器注射。在更換稀釋度時(shí)應(yīng)用下1稀釋度液洗2～3次，洗液廢棄。由高稀釋度向低稀釋度依次注射。
4.6觀察
試驗(yàn)小白鼠至少應(yīng)每日上、下午各觀察1次，并記錄發(fā)病及死亡情況，連續(xù)5日。
4.7結(jié)果判定
4.7.1對(duì)照小白鼠應(yīng)于72～120小時(shí)之內(nèi)全部死亡，待檢抗毒素之效價(jià)應(yīng)以與對(duì)照小白鼠同時(shí)死亡的最高稀釋度判定之。
4.7.2有下列情況之一者應(yīng)予重試：
（1)待檢抗毒素之稀釋度過高或過低。
（2)對(duì)照試驗(yàn)小白鼠在72小時(shí)前或120小時(shí)后死亡。
（3)死亡不規(guī)則以及在一稀釋度的小白鼠中有2只以上屬非特異死亡。
