中國(guó)幽門(mén)螺桿菌研究:美藍(lán)染色檢查胃粘膜幽門(mén)螺桿菌

自從1983年Marshall報(bào)告幽門(mén)螺桿菌（Hylicwww.med126.comobacter Pylori，Hp)以來(lái)，各國(guó)學(xué)者對(duì)其研究極為火熱，它明確Hp與慢性胃炎，消化性潰瘍的發(fā)生，發(fā)展及復(fù)發(fā)相關(guān)。近年甚至認(rèn)為Hp感染與胃癌相關(guān)。因而尋找一個(gè)簡(jiǎn)便而有效的Hp檢查方法日益受到重視。我們?cè)趯?shí)踐中摸索出的美藍(lán)染色效果較好，并與尿素酶試驗(yàn)，細(xì)菌培養(yǎng)，Warthin－Starry銀染色法及HE染色法進(jìn)行了比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料和方法

1.1　材料

無(wú)選擇地對(duì)因有消化不良等上消化道癥狀來(lái)院作纖維胃鏡檢查者作快速Hp尿素素酶試驗(yàn)（用福建三強(qiáng)公司Hp藥盒)。分別取尿素酶試驗(yàn)陽(yáng)性者100例及陰性者50例作胃竇粘膜活組織菌培養(yǎng)及組織切片HE染色，Warthin－Starry銀染色及美藍(lán)染色檢查Hp。

1.2　細(xì)菌培養(yǎng)

取胃粘膜活組織研碎，于1h內(nèi)bhskgw.cn接種在加有兩性霉素，萬(wàn)古霉素，TMP的血瓊脂培養(yǎng)基上，置37℃和微需氧條件下培養(yǎng)4—7d，3d后即開(kāi)始觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況；根據(jù)菌落特征，革藍(lán)染色，尿素酶試驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)加以鑒定，若7d后培養(yǎng)仍無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，則為陰性。

1.3　HE及Warthin－Starry銀染色

石蠟切片脫蠟入水后常規(guī)HE染色Warthin－Starry銀染色參照Warthin法進(jìn)行。

1.4　美藍(lán)染色

石蠟切片常規(guī)脫蠟入水后用0.03％美藍(lán)溶液染0.5min～2min（視染液新舊而定)，然后自來(lái)水清洗，再常規(guī)脫水，透明樹(shù)膠封固，最后閱片。

2　結(jié)果

經(jīng)尿素酶試驗(yàn)，Warthin－Starry染色，美藍(lán)染色，HE染色及細(xì)菌培養(yǎng)等5種方法檢查Hp結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　組織切片染色法檢查Hp結(jié)查

美藍(lán)染色鏡下觀察Hp呈藍(lán)色，胃粘膜上皮，胞漿及分泌物呈淡藍(lán)色，固有膜，結(jié)締組織呈深藍(lán)色。Hp呈彎曲狀，S狀、短弧狀及桿狀，位于胃小凹或胃小凹分泌物中，亦可見(jiàn)于上皮細(xì)胞漿中。HE染色細(xì)菌著色淺淡，鏡檢時(shí)需非常仔細(xì)找才能發(fā)現(xiàn)。Warthin－Starry銀染色細(xì)菌被染成淺黑色，組織背景呈黃棕色，易于辨認(rèn)。

3　討論

在作胃鏡檢查的同時(shí)取粘膜活組織作Hp檢查是目前常用的檢查Hp的途徑。其中尿素酶試驗(yàn)方法簡(jiǎn)便但不能直接觀察細(xì)菌，可出現(xiàn)假陽(yáng)性及假陰性，常被用來(lái)作初步篩選之用，或被沒(méi)有病理檢查條件的基層單位所采用。細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果可靠，但費(fèi)時(shí)太久，亦有假陽(yáng)性存在，除非對(duì)已知有Hp感染而常規(guī)治療失敗者，一般臨床未作常規(guī)檢查。胃粘膜活組織切片染色鏡檢，以其直觀準(zhǔn)確，不需在病理活檢以外另取活組織而受到重視。但常規(guī)病理切片的HE染色時(shí)Hp著色淺淡，不僅觀察困難而且常容易漏診。經(jīng)典的Warthin－Starry銀染色法，細(xì)菌與組織對(duì)比度強(qiáng)，觀察容易準(zhǔn)確率高，但染色過(guò)程繁鎖，費(fèi)時(shí)，顯色時(shí)間也較難掌握，也很難作為臨床常規(guī)使用。

我們?cè)趯?shí)路中摸索的美藍(lán)染色，染色操作簡(jiǎn)便，快速，細(xì)菌與組織背景對(duì)比明顯，用高倍光學(xué)顯微鏡即可清晰地辨認(rèn)出Hp來(lái)，結(jié)果可靠，準(zhǔn)確率高，值得推廣應(yīng)用。