�。ㄈ�)電鏡免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用
免疫電鏡在細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)水平應(yīng)用抗原與相應(yīng)抗體能特異性結(jié)合的原理，使用標(biāo)記抗體對細(xì)胞內(nèi)存在的抗原性物質(zhì)進(jìn)行定性、定位和定量觀察，是免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在亞細(xì)胞水平的進(jìn)一步發(fā)展。
1．免疫電鏡標(biāo)本制備 腎臟組織的免疫電鏡標(biāo)本制備與一般透射電鏡標(biāo)本的制備有所不同，其具體步驟如下：
�。�1)固定與包埋：腎臟組織一般采用低濃度戊二醛為固定劑，而不使用鋨酸，以盡可能多地保存抗原活性，常使用甲醛-戊二醛固定液（甲醛4%，戊二醛0.05%~0.5%)。包埋劑常使用 Lowicryl K4M（丙烯酸酯類化合物)或LRWhite 樹脂在-20~35℃低溫下包埋，以紫外線照射使之聚合。避免使用常規(guī)之環(huán)氧樹脂包埋，因環(huán)氧樹脂需加熱使之聚合，而使標(biāo)本之抗原活性下降。
�。�2)修塊、定位及切片：包埋后之組織塊經(jīng)初步修塊后，先在超薄切片機(jī)上用玻璃刀（勿用鉆石刀)切出一張0.5~1μm厚的半薄片，用1%鹼性復(fù)紅或美藍(lán)溶液進(jìn)行染色，在光鏡下觀察組織內(nèi)腎小球的數(shù)量及病變情況，挑選出一個病變最為典型的腎小球，作出標(biāo)記。然后在組織塊上定出相應(yīng)部位，用刀切去周圍組織，修成約0.1mm大小之組織塊，再用超薄切片機(jī)切出500 。A厚度的超薄切片。
（3)免疫標(biāo)記：目前應(yīng)用最多的是膠體金標(biāo)記抗體（詳見第七章 )。
2．免疫電鏡觀察 腎組織標(biāo)本皆采用包埋后染色，第一抗體為特異性抗血清（如兔抗人IgG)，第二抗體為膠體金標(biāo)記之抗體（如豬抗兔IgG，金標(biāo)記Au10)。最后用枸椽酸鉛（或醋酸鉛)作對照染色，在透射電鏡下觀察。根據(jù)金顆粒的分布狀況，可作定位、定性及定量觀察，了解腎小球超微結(jié)構(gòu)成分的變化、探討腎臟疾病的病原及研究免疫復(fù)合物（沉積之電子致密物質(zhì))的組成成分等（詳見后)。
二、血清或腎臟洗脫液的檢查
腎臟疾病時，血清學(xué)檢查亦甚為重要，現(xiàn)僅就與免疫細(xì)胞化學(xué)有關(guān)者介紹如下：
1．血清或腎臟洗脫液內(nèi)抗腎小球基底膜抗體的測定 在快速進(jìn)行性腎小球腎炎（RPGN)及Goodpasture綜合征病人血清中常存在有抗腎小球基底膜抗體，對病人血清進(jìn)行檢查有重要的診斷意義。動物實驗中，對馬杉氏腎炎等實驗性腎小球腎炎動物，進(jìn)行腎臟洗脫液的檢查，以確定有無抗腎小球基底膜抗體的存在。一般常用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)進(jìn)行檢查，先將病人血清與靈長類（如猴等)的腎組織冰凍切片在37℃濕盒內(nèi)孵育半小時，再將切片用FITC熒光素或HRP標(biāo)記的抗人Igg 抗體處理。如果病人血清中存在有抗腎小球基底膜抗體，即可與切片上的腎小球基底膜相結(jié)合，進(jìn)一步與熒光標(biāo)記抗人IgG抗體相反應(yīng)，而顯示沿腎小球毛細(xì)血管壁呈連續(xù)線形之熒光分布（酶標(biāo)抗體亦顯示同樣之連續(xù)線形分布)。本方法又可用于與抗腎小管基底膜抗體和抗核抗體的鑒別。
2．血清中循環(huán)免疫復(fù)合物內(nèi)IgG亞類的分析 以3%聚乙二醇（PEG)沉淀病人血清中大分子蛋白質(zhì)，分別使用鼠抗人IgG亞類IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的單克隆抗體，以ELISA法測定免疫復(fù)合物內(nèi)IgG亞類的分布狀況。以同樣方法亦可測定腎小球中沉積的免疫復(fù)合物內(nèi)的IgG亞類。Noel 報道，不同腎炎時腎小球內(nèi)沉積之IgG亞類有所不同。原發(fā)性膜性腎炎之沉積物為Igg 1和IgG4，狼瘡性腎炎之沉積物為IgG1、IgG2和IgG3。
3．血清中Tamm-Horsfall糖蛋白（THP)的測定 THP是由腎小管髓袢升支厚壁段及遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞合成的糖蛋白，主要存在于正常人的尿中，血清中含有微量。當(dāng)腎功能減退時，血及尿中THP明顯降低，尿毒癥時則血及尿中幾乎測不出THP。目前可使用抗THP單克隆抗體，用ELISA夾心法測定血清中THP的含量。第一抗體使用鼠抗人THP單克隆抗體，第二抗體為HRP標(biāo)記的兔抗鼠IgG。
4．其它 血清中自身抗體如抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗Sm抗體等的測定，對狼瘡性腎炎有診斷意義�？怪z點抗體的測定對進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化（硬皮病)有診斷意義，以上測定皆使用免疫熒光法，具體操作不再贅述。
