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免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在腎臟疾病中的應(yīng)用范圍

 

  三、尿液的檢查

  1.尿中THP測定  如前所述,使用抗THP單克隆抗體進(jìn)行測定。除在慢性腎功能損害時血中及尿中THP下降以外,目前提出當(dāng)腎移植急性排斥反應(yīng)時或毒性物質(zhì)導(dǎo)致腎小管大量破壞時,尿中可出現(xiàn)THP升高。

  2.尿中抗體包裹細(xì)菌的測定  尿路感染可分為上尿路感染(腎盂腎炎)和下尿路感染(膀胱炎、尿道炎及前列腺炎)。上尿路感染時,細(xì)菌來源于腎組織,機(jī)體對細(xì)菌產(chǎn)生抗體而包裹于細(xì)菌表面,形成抗體包裹細(xì)菌(ACB)?贵w為IgG、IgA或IgM組成,可用熒光素標(biāo)記的抗人lgG、lgA、或lgM與之結(jié)合而使其顯示熒光。反之,下尿路感染之細(xì)菌,一般不能形成抗體包裹細(xì)菌,用免疫熒光檢查常為陰性,故能對上下尿路感染進(jìn)行鑒別診斷。

  3.尿沉渣中管型及粘液絲中免疫球蛋白之測定  使用直接熒光進(jìn)行觀察,腎小球腎炎病人尿沉渣中管型及粘液絲可觀察到IgG、IgA或IgM。一般認(rèn)為是由于病變腎小球漏出之免疫球蛋白,與腎小球內(nèi)沉積之免疫球蛋白可能無關(guān)。但泌尿系感染時尿中粘液絲中很少檢出免疫球蛋白。故本檢查有助于腎小球腎炎與泌尿系感染的鑒別。

  四、腎小球細(xì)胞的體外培養(yǎng)

  腎小球的固有細(xì)胞有3種,即系膜細(xì)胞、臟層上皮細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞。近年來隨著細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展,腎小球的體外培養(yǎng)亦受到了重視。1969年Bernik首先在體外培養(yǎng)腎小球成功,并初步培養(yǎng)出系膜細(xì)胞,1975年Fish 正式分離培養(yǎng)系膜細(xì)胞獲得成功,1978年Kreisberg分離培養(yǎng)上皮細(xì)胞成功,1984年Striker分離培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞成功。目前,國內(nèi)亦有不少單位從事腎小球細(xì)胞體外培養(yǎng)工作,已取得一定成績。腎小球細(xì)胞的體外培養(yǎng),不僅限于正常人及兔、鼠等動物,目前亦發(fā)展至腎臟病人腎穿刺組織進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。經(jīng)體外培養(yǎng)的一生長之原代培養(yǎng)細(xì)胞需進(jìn)行鑒定,除使用光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡觀察其形態(tài)及結(jié)構(gòu)外,尚需進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色而使用一系列免疫酶標(biāo)記的相應(yīng)抗體。例如使用抗結(jié)蛋白(desmin)單克隆抗體和抗肌動蛋白(actin)單克隆抗體(ABC試劑盒),對上皮細(xì)胞進(jìn)行鑒定,二者皆為強(qiáng)陽性。使用抗細(xì)胞角蛋白(cytokerfatin)單克隆抗體(ABC試劑盒),對上皮細(xì)胞進(jìn)行鑒定,以鹼性磷酸酶為底色,上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)可見紅色顆粒。內(nèi)皮細(xì)胞之鑒定則使用抗Ⅷ因子單克隆抗體(因第Ⅷ因子只在內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)生成)。

  此外,目前已認(rèn)識到天很多生物活性因子如白細(xì)胞介素-1及6、血小板源性生長因子(PDGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGFβ)、內(nèi)皮素等皆可對系膜細(xì)胞、上皮細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞起作用。使用其合成及分泌多種細(xì)胞因子如血小板活化因子、前列腺素E2、白細(xì)胞介素-1、6、8等。人們可應(yīng)用分子雜交免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù),探知系膜細(xì)胞、上皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞中相應(yīng)細(xì)胞因子mRNA的表達(dá),從而了解在不同腎小球疾病中各種細(xì)胞功能的變化。對腎小球體外培養(yǎng)細(xì)胞的分子生物學(xué)研究,開拓了研究腎小球疾病機(jī)制的廣闊領(lǐng)域。

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