恙螨在我國分布廣泛, 不但是恙蟲病的傳播媒介, 而且還可能傳播出血熱病毒等其他病原體。因此恙螨控制對防止恙蟲病等蟲媒病具有重要意義。目前恙螨的控制主要通過消滅鼠類、殺滅恙螨、清除孳生環(huán)境等方面綜合措施根除孳生地，結合個人集體防護等，以達到控制恙螨，控制恙蟲病的目的。
鼠是恙螨幼蟲的主要宿主，又是恙蟲病的傳染源, 消滅鼠類是防治恙蟲病的根本方法。其一是在恙螨的生活史的七個階段中，恙螨未食幼蟲必須在動物體上吸食，才能繼續(xù)發(fā)育，而鼠類是恙螨幼蟲最喜歡的宿主。 沒有機會叮咬吸食動物宿主的恙螨幼蟲，最終因饑餓死亡； 其二是媒介恙螨體內(nèi)之所以不間斷地攜帶恙蟲病東方體，特別是經(jīng)過恙蟲病東方體在恙螨體內(nèi)消失一定時間和代數(shù)后，恙螨叮咬攜帶恙蟲病東方體的鼠類是又可以重新獲得感染，使恙蟲病東方體在恙螨體內(nèi)能長期維持和代代傳遞，以致恙蟲病例不斷出現(xiàn)。因此，消滅鼠類是切斷恙蟲病流行的一個重要環(huán)節(jié)。滅鼠是消滅恙螨的一項根本性措施。
通過改變恙螨的生長環(huán)境來控制恙螨種群的數(shù)量。根據(jù)恙螨的生態(tài)習性因地致宜進行。如定期大搞環(huán)境衛(wèi)生，鏟除雜草和去除亂磚堆。恙螨在野外主要孳生在雜草叢中，根據(jù)某地鏟草經(jīng)驗，鏟去雜草和表面浮土，恙螨數(shù)量大大降低。清除亂磚堆，也可減少恙螨的孳生。在居民點內(nèi)，通過修建下水道、開溝渠、填土等方法降低恙螨孳生地所在的地下水位；清除垃圾雜物、瓦礫等； 或鋤松表層泥土，鋪平后壓實，最好加一層黃泥或砂石壓實，改變遮蔭情況，使地面的蒸發(fā)加快，破壞恙螨的孳生地。在野外建筑永久或臨時房屋時，可用翻土機翻土，再用壓路機壓實，達到全部消滅孳生地的目的。不能用這種方法處理的種植地帶，尤其是耕作地的邊緣地帶，應常改變環(huán)境，如開墾種植，精耕細作，消滅所有的荒地和半荒地, 以達到消滅恙螨孳生地的目的。
藥物殺螨的方法，費用較大，困難較多，效果也并不一致。二十世紀50年代使用的殺螨劑和其它昆蟲的殺蟲劑種類一樣。在恙蟲病流行區(qū)，曾大面積使用0.5%丙體六六六粉劑，有一定效果。用0.5%丙體六六六粉劑噴灑草地證明持續(xù)時間較長，有效殺螨期可達20d，控制恙螨繁殖達40d。疫區(qū)處理時，可用0.5~1.0%敵敵畏溶液定期噴灑鋪草、地板和房頂之稻草，或用6%六六六1.2克/平方米殺滅恙螨，效果良好。此外，還必須保持室內(nèi)干燥和清潔。在人們經(jīng)�；顒拥膱鏊�，噴灑敵百蟲等，有較好的滅螨效果。
由于昆蟲螨類對上述殺蟲劑產(chǎn)生抗藥性，殺蟲劑種類不斷更新， 特別是對人畜毒性大，化學性質(zhì)不穩(wěn)定，殘效期短，成本高，或對環(huán)境污染嚴重的殺蟲劑，不能廣泛大量應用。因而不斷發(fā)展出新型殺蟲劑。人工合成除蟲菊、植物性殺蟲劑等研究增多。目前已生產(chǎn)使用的擬除蟲菊酯類殺蟲劑，殺蟲作用強，快速，對人畜安全，殘效較長，成為有發(fā)展前途的一類新型殺蟲劑。昆蟲生長調(diào)節(jié)劑如保幼激素和發(fā)育抑制劑等，還處于試驗階段。 有些地區(qū)采用燃燒草地的方法，使地面的潮濕情況暫時改變，不利于恙螨孳生，以達到控制恙螨的目的。
個人防護和集體防護雖然比較麻煩，但容易實施，效果較好。
1. 個人防護 是指在疫區(qū)野外作業(yè)者使用防護劑和防護措施，以防恙螨幼蟲叮咬。具體方法包括：①如在疫區(qū)雜草叢生的野外工作、宿營時，要求做到扎緊褲管、袖口和領口；用三角巾包扎頭部和面部，防止恙螨幼蟲侵襲人體。②不要坐臥草地上，不在雜草叢中坐臥休息，工作時脫下的衣服不要放在草叢上。穿驅蟲劑浸泡過的衣服，防恙螨侵襲效果好。早期使用石油油精肥皂和硫磺配置成浸泡液，后使用丁基苯二酸或苯二甲酸二丁酯或苯二甲酸二甲酯，安息香酸甲苯，二苯基乙二酮或水楊酸二甲噻吩酯；近年也試用溴氰菊酯浸泡衣服防螨侵襲。③外露皮膚亦可涂擦驅蟲劑和驅避劑等，防螨叮咬。在皮膚裸露部位涂擦鄰苯二甲酸二甲脂，苯甲酸芐酯等，防螨侵襲。
在有條件的地方，野外作業(yè)后，應立即洗澡和換洗衣服，或用過的衣服立即加以燙熨處理，以殺滅隱蔽在衣服縫隙中恙螨幼蟲。
2. 集體防護 集體活動如在疫區(qū)野外宿營或野外作業(yè)，必須首先清除地面雜草，最好加以焚燒。營區(qū)周圍挖防鼠溝并噴灑藥物建立防護帶，盡量做到睡高鋪，防螨叮咬，避免集體性的恙蟲病爆發(fā)。
（一)恙螨種類調(diào)查 以嚙齒動物和食蟲動物為調(diào)查的主要宿主，一般調(diào)查的對象為鼠類，為使調(diào)查資料能作為流行病學分析的科學依據(jù)，對調(diào)查鼠體上恙螨種類和數(shù)量的準確性，采集恙螨應做到：①捕獲活鼠，保證收集到的恙螨種類和數(shù)的準確性。②檢集恙螨的鼠體部位有耳窩內(nèi)、耳殼上、耳背基部、肛門、生殖器附近、胸部、后腿、鼻腔內(nèi)和鼻周圍等，做到不漏檢部位。③恙螨種類的鑒定包括初步鑒定即在雙目解剖鏡下根據(jù)成堆的活恙螨幼蟲體色和外形等初步鑒定屬種。進一步鑒定是用貝氏制片液制作l~2片玻片標本，在酒精燈上慢慢加熱使標本基本透明（或用飽和石碳酸溶液快速透明亦可)，在顯微鏡下鑒定，證實解剖鏡鑒定是否正確，做到捕獲的鼠類當天就可分類計數(shù)登記。
（二)生態(tài)學調(diào)查 不同孳生地捕鼠或小鼠定點誘餌收回。檢查鼠體的恙螨幼蟲，分別記錄不同類型孳生地的恙螨種類及數(shù)量；以鼠類為主的調(diào)查對象，捕獲活鼠收集恙螨，可作種類的初步鑒定，計算每種鼠的帶螨率和帶螨指數(shù)來表示某種恙螨對宿主的選擇性。計算方法如下：
帶螨率=（帶恙螨鼠數(shù)÷檢查鼠總數(shù))×100
帶螨指數(shù)=（檢獲某種恙螭數(shù)÷檢查鼠總數(shù))×100
恙螨的季節(jié)分布是采用逐日或逐旬統(tǒng)計鼠體恙螨指數(shù)，求出消長曲線。常用每旬一次，用帶螨率和帶螨指數(shù)計算密度，觀察季節(jié)消長；在恙螨幼蟲密度高的地方，挖土15cm×15cm×5cm，連同地面的植物腐爛物質(zhì)，放于有水的盆中，將土及腐植質(zhì)在水中攪拌，成蟲或若蟲浮予水面，用毛筆挑出集中。
（三)流行病學調(diào)查
1. 分離恙螨幼蟲體內(nèi)的恙蟲病東方體 從捕獲的鼠類或其他動物宿主，將恙螭幼蟲挑出（耳窩部位最多)，幼蟲分類分組后，以一定數(shù)量的恙螨幼蟲用無菌生理鹽水洗凈，放入研磨器；加入含青霉素1000單位／ml，，鏈霉素1000ug／ml，的生理鹽水1ml，研磨后放4℃冰箱4h，然后注入3只小鼠（BALB／c小鼠，3周齡)的腹腔。小鼠發(fā)病。解剖后取腹膜涂片，或腹水或腫大脾作涂片，Giemsa染色后鏡檢，發(fā)現(xiàn)典型恙蟲病東方體則為陽性，進一步作血清學的鑒定。
分離恙螨幼蟲的恙蟲病東方體傳統(tǒng)法多用集體恙螨接種，這樣每組恙螨幼蟲數(shù)多少而有差異，一般每組恙螨多者。分離東方體的陽性率也高，同樣PCR法50個幼蟲比10個幼蟲的東方體DNA陽性亦越高。鑒于每組恙螨數(shù)不同，按組計算恙螨的自然感染方面，以恙螨最低感染率，分析恙螨的自然感染率更有意義。計算用：恙螨最低感染率=陽性組數(shù)÷檢查恙螨總數(shù)；另外恙螨的飽食程度與恙蟲病東方體分離陽性率也有關系，試驗說明：傳統(tǒng)法和PCR技術檢測恙蟲病東方體飽食坳的陽性率均比未進食幼蟲高。
2. 恙蟲病東方體經(jīng)卵傳遞試驗 恙螨一個生活周期中只有幼蟲期寄生，而且叮咬飽食后不再叮咬，所以經(jīng)卵傳遞是恙螨作為傳播媒介的必要條件；或者經(jīng)精胞傳遞，亦是由雌蟲攝取雄蟲產(chǎn)下地面的精胞間接受精，雌蟲獲得有恙蟲病東方體的精胞后，最終也要經(jīng)卵傳遞至子代，因此本試驗包括經(jīng)精胞傳遞，東方體經(jīng)卵傳遞試驗是流行病學調(diào)查不可缺少的工作。
3. 人群的調(diào)查 流行區(qū)病人的診斷，采用PCR技術。
恙蟲病東方體分離的標本有：①實驗小鼠脾、血；②野外捕獲的野鼠脾、血；③野鼠體上檢獲的恙螨幼蟲等。鼠血（肝素抗凝，新鮮)0.3~0.5mL腹腔注射。鼠脾和恙螨幼蟲各按需要量分別用無菌生理鹽水洗凈，分別放人研磨器，加入含青霉素1 000單位／ml，鏈霉素1000μg／ml的生理鹽水lml，研磨后的脾懸液和幼蟲懸液放4℃冰箱4h，然后各注入3只小鼠（BALB／C)的腹腔。鼠血、脾懸液和幼蟲懸液注射的小鼠分別置特制的鐵籠內(nèi)飼養(yǎng)和觀察，經(jīng)一定時間小鼠發(fā)病，解剖腹膜涂片或脾作印片，Giemsa染色，鏡檢，發(fā)現(xiàn)典型的恙蟲病東方體則為陽性，進一步作血清學的鑒定。如解剖的小鼠未查到東方體，盲傳2代均陰性結果時，才算為陰性。
臨床診斷的病原體分離：動物接種以小鼠（BALB／C上鼠，2周齡)最敏感。早期病人可取全血0.3~0.5ml（肝素抗凝)注入小鼠腹腔。接種后一般2周左右發(fā)病，如松毛、眼閉和有分泌物、呼吸急促、腹膨大、活動遲緩等，應立即進行解剖，可見皮下出血、兩肺充血和水腫、肝脾和淋巴結充血腫大、并有胸水和腹水。取肝、脾和腹水等作涂片。Giemsa染色，鏡檢。陽性可見內(nèi)皮細胞內(nèi)的恙蟲病東方體。東方體分布在腦、肝、脾和腎等器官都較高。診斷用的小鼠分離法。陽性率最高達80％，有弱毒株經(jīng)多次傳代的小鼠雖有脾腫大和腹水，但無癥狀，也不死亡，涂片也查不到東方體，應做免疫學試驗。即取傳代鼠脾制成懸液，稀釋成不同濃度（10-1~10-5)，接種于小鼠皮下進行免疫，4周后不死的鼠用已知恙蟲病東方體毒株攻擊。以一定濃度腹腔內(nèi)注射，均出現(xiàn)很強的免疫力。如弱株接種的不鼠血、脾、腹水等標本可做PCR檢測，該技術簡便、快速、特異和敏感。
（一)恙蟲病東方體人工接種成蟲法
1. 恙螨 經(jīng)實驗室純系培養(yǎng)證實無東方體感染的地里纖恙螨，并連續(xù)傳代飼養(yǎng)30代以上的成蟲。培養(yǎng)和傳代均按實驗室常規(guī)方法。
2. 恙蟲病東方體 純化的Karp株，對BALB／C小鼠LD50為10-6~10-8 。
3. 東方體懸液的制備 小鼠（BALB／C)腹腔接種富含恙蟲病東方體Karp株的鼠脾懸液（1：10)0.5ml，小鼠發(fā)病，活動遲緩，聳毛。眼分泌物多，瀕死時解剖，每只鼠以30％蔗糖緩沖液3ml沖洗腹腔，取沖洗液離心5 000rpm／min，10min，4℃2h或室溫15℃，離心10 000rpm／min，10min，取其沉淀加4倍量30％蔗糖緩沖液（含谷氨酰胺和1％牛血清白鬣白)，即制成濃醫(yī)學檢驗網(wǎng)縮東方體懸液，涂片，Giemsa染色．，平均每視野約20個東方體，置4℃冰箱當日接種。
4. 30％蔗糖緩沖液（pH7.0)配方 蔗糖0.218M×mw 342.30=74.6214mg；KH2PO4 0.0038M×mw l36.09=0.517mg；K2HPO4?3H 2O 0.0072M×mw 228.23 = 1.643mg；谷氨酰胺0.0049M×mw l46.15=0.716mg；蒸餾水1 000ml。若加入1％血清蛋白效果更好。過濾除菌后分裝，置4℃冰箱保存?zhèn)溆�。用于含東方體材料的洗滌，可保護東方體。
5. 接種“針” 用外徑6~7mm的優(yōu)質(zhì)玻璃管，一端在酒精噴燈上拉成外徑約1mm的細管，再將細管端在酒精燈細火焰上拉成極細的毛管尖頭，用微量器定量，在細管壁上每1μl用細油性筆劃記號一個。再在兩刻度間分成四等份，即制成了接種“針”。在另一端裝上橡膠滴頭，接種時起著調(diào)控作用。
6. 恙螨接種與檢測感染率 恙螨成蟲置于濾紙片上，用底部裝有吸人了乙醚的脫脂棉的青霉素瓶將蟲罩住，等一定時問恙螨麻醉后，把瓶除去，已麻醉的成蟲移置雙目解剖鏡下進行腹部接種，每蟲接種東方體體懸液約0.1μl ，接種后的成蟲置石膏炭粉管培養(yǎng)。接種的成蟲用直、間接免疫熒光染色法和金銀免疫染色法，加上透射電鏡觀察的檢測其東方體感染率達41.2％以上；用PCR技術檢測感染率高達92.3％．接種后的成蟲4個月后其存活率為83.7％，成蟲一年內(nèi)能保持較好的生殖能力。經(jīng)人工接種的恙蟲病東方體Karp株，能在恙螨體內(nèi)增殖長達360d以上，bhskgw.cn并經(jīng)卵傳遞至少4代子代。
（二)幼蟲叮咬小鼠法 含恙蟲病東方體的腹水0.5ml給小鼠腹腔注射，小鼠置鐵籠飼養(yǎng)．于注射后約3周即小,鼠發(fā)病前2d，小鼠在乙醚麻醉下，挑取地里纖恙螨未食幼蟲（孵出2~3d)約200只，叮咬病鼠耳，48h后挑取出飽食蚴，置炭粉管內(nèi)25±1℃培養(yǎng)，取出飽食蚴后，即解剖病小鼠，腹膜涂片，Giemsa染色，鏡檢東方體。
（一)直接免疫熒光染色 取一定量需檢測的恙螨標本（成蟲、或卵、或幼蟲、或蛹)置經(jīng)處理干凈的玻片上，蟲體在玻片的要求位置，分別在雙目解剖鏡下壓出內(nèi)容物，涂片，刎除外骨骼和卵殼，風扇吹干；室溫、四氯化碳固定10min，風干；滴加熒光標記MeAb（如采用標記單克隆抗恙蟲病東方體Karp株抗體…等)。置墊有濕紗布的具蓋托盤內(nèi)，37℃孵育30min；0.05M pH7.4 PBS浸洗三次，每次3min，蒸餾水浸泡1~2min脫水，風干，用90％甘油緩沖液封片，鏡檢。使用多功能大視野熒光顯微鏡觀察。出現(xiàn)特異性顆粒狀熒光為陽性，無特異性熒光為陰性。對照組為非感染的純系恙螨。
（二)間接免疫熒光染色 采用羊抗兔IgG熒光標記抗體，用0.02％伊文思蘭-PBS液稀釋成1:2。
1. 免疫恙蟲病東方體Karp株抗體的制備 每次取高含恙蟲病東方體Karp株的鼠脾懸液（1：10)2ml，腹腔接種新西蘭白兔，共5次，每次間隔一周，末次注射一周后試血，經(jīng)IFA測定滴度>1：64時心臟穿刺放血。分離血清經(jīng)56℃，30rain水浴滅活．分裝存于-21℃，為兔抗恙蟲病東方體Karp株免疫血清。本法的制片和固定同直接免疫熒光染色。兔抗恙蟲病東方體用0.01M pH7.4 PBS稀釋成1：64使用，羊抗兔IgG熒光抗體用，0.02％伊文思蘭-PBS液稀釋成1：2使用。
（三)免疫金銀染色 羊抗兔IgG膠體金標記抗體（SARG)有生物制品標準產(chǎn)品。按IGSS間接法步驟進行。取受檢恙螨（成蟲或幼蟲或、卵或蛹等)，成蟲或幼蟲用乙醚麻醉致死．置玻片上，在雙目解剖鏡下壓出內(nèi)容物，涂片，刎除外骨骼，風干；室溫，四氯化碳固定10min，風干，0.02M Tris-HCl緩沖液（TBS pH8.2)濕滴，1:10正常羊血清5min；1：64兔抗恙蟲病東方體Karp株抗體，室溫8h，1：10正常羊血清5min, SARG 1：10，室溫8h；0．02M TBs浸洗三次，雙蒸水洗三次，枸櫞酸緩沖液浸洗5min，物理顯微影30min（暗室操作)，枸櫞酸緩沖液浸洗5min，雙蒸水洗三次，蘇木素襯染2min，自來水洗，風干, 油鏡觀察。出現(xiàn)特異性棕黑色顆粒為陽性，無特異性顆粒為陰性。對照組為非感染的純系恙螨。
（一)恙蟲病東方體DNA的提取
1. 標本：恙螨蒸餾水浸泡2h，中間換水1次，洗凈恙螨置于研磨器，加適量的TE液研磨成懸液備用。
2. 鼠血、脾和腹水組織標本：實驗室恙蟲病東方體感染鼠發(fā)病后或野外捕獲野鼠處死解剖后，分別取鼠血、脾和腹水標本。①鼠血：一般眼球放血，采全血，用肝素抗凝（或采樣是將血直接置于肝素管)； 血塊標本則加TE液適量研磨備用。②脾或其他組織：脾組織加蔗糖緩沖液（SPG)磨碎，取少量用于提取DNA, 其余置-80℃凍存。
3. 腹水及腹腔沖洗液：蔗糖緩沖液沖洗腹腔，吸取腹水，2000rpm，15min離心，沉淀加適量TE混懸，備用。
4. 人血標本的處理：同鼠血標本處理。
（二)恙蟲病東方體的PCR檢測
聚合酶鏈反應技術應用于恙蟲病東方體研究是恙蟲病研究的一個突破，它為研究恙螨和動物宿主體內(nèi)恙蟲病東方體的動態(tài)變化與流行規(guī)律等研究提供有效的方法。作者等曾用免疫熒光、免疫金銀等檢測恙螨體內(nèi)的東方體，其陽性率為41%，而用PCR技術檢測恙螨體內(nèi)恙蟲病東方體的陽性率則在90%以上。
1. 恙蟲病東方體的PCR檢測
（1)Sta58引物：根據(jù)恙蟲病東方體Sta58基因編碼區(qū)序列合成的引物如下：
Primer 1 5’ —ACTACTGCTACAGTTATAGC—3’；
Primer 2 5’ —GAGTAAGAGCTTCTCCGTC—3’。擴增片段987bp。
（2)PCR反應體系：10×PCR buffer 5μl，dNTPs（2mM)5μl，primer 1和primer 2各1μl，Taq E （1U/μl) 2μl，Rt-DNA 5μl，ddH2O39μl，反應體積為50μl。
2. 恙蟲病東方體NPCR檢測
根據(jù)恙蟲病東方體Sta56基因編碼區(qū)序列設計合成群引物如下:
Rt34 5’—TTGCTAGTCCAATGTCTGC—3"
Rt55 5’—CCCTGCTGCTGTGCTTGCTGCG—3"
Rt10 5’—CCGAATTCATGCCTGAGCCTACTATAATGCC—3"
Rt11 5’—CGGGATCCTTAGACAGATGCACTATTAGGC—3"
3. 核酸雜交檢測PCR產(chǎn)物
用核酸雜交法檢測PCR產(chǎn)物具有比電泳檢測PCR產(chǎn)物，單純核酸雜交法更高的敏感性和特異性，據(jù)實驗室敏感性和特異性的比較，PCR結合核酸雜交法比NPCR法敏感10倍，比Sta58引物PCR敏感100倍，比核酸雜交敏感1000倍，但需時較長，不適合于做臨床診斷。但一次可處理較多標本，可用于恙蟲病流行病學研究。
4. NPCR檢測恙蟲病東方體流行株型
根據(jù)恙蟲病東方體主要表面蛋白Sta56基因編碼區(qū)序列設計合成恙蟲病東方體型特異引物序列如下：
Karp株（KP): 5’--GCTTCGAAACAATATGGGATTTATAACC--3’
Gilliam株（G): 5’--CTTTATATCACTATATATCTT-3’
Kato株（KT): 5’--GAATATTTAATAGCAATGGA--3’
Kawasaki株（KW): 5’--ATGCTGCTATTGATACAGCC--3’
Kuroki株（KR): 5’--CACCGGATTTACCATCATAT--3"
經(jīng)實驗室檢測證實，Karp株、Gillism株、Kato株、Kuroki株和Kawasaki株特異性引物對僅擴增各相應的分離株，對其它株則無擴增。 KP和引物Rt10擴增后產(chǎn)物為230bp多核苷酸；G和引物Rt10擴增后產(chǎn)物為407bp多核苷酸; KT和引物Rt10擴增后產(chǎn)物為242bp多核苷酸; KW和引物Rt11擴增后產(chǎn)物為523bp多核苷酸; KR和引物Rt10擴增后產(chǎn)物為220bp多核苷酸。
恙螨的實驗室培養(yǎng)是從事媒介恙螨和恙蟲病病原體及傳病機制等科研工作的基礎，恙螨培養(yǎng)需要適宜的培養(yǎng)基, 溫度、濕度以及食物和宿主，目前一般采用石膏碳粉管培養(yǎng)法。
1. 培養(yǎng)所需的材料 石膏、碳粉、無底厚玻璃圓筒（高6.5cm，外徑3cm)、光照培養(yǎng)箱、解剖鏡、蚤卵、小鼠等
2. 石膏碳粉培養(yǎng)管的制作 在無底厚玻璃圓筒的一端倒入已調(diào)好的石膏漿，厚度約為0.3~0.5mm，凝固后傾入已加少些水的混合碳粉石膏粉（碳粉石膏粉的比例為3：1或9：1)，將碳粉石膏粉壓實制成0.5~1.0mm的厚度，再在玻璃筒的另一端緊塞以適當大小的包裹綢布的膠塞即可。為防培養(yǎng)基生長霉菌，在制培養(yǎng)管前碳粉石膏粉需高溫消毒；或在碳粉石膏粉中加入0.01%硫酸汞，亦可達到防止霉菌生長。
3. 培養(yǎng)所需的溫度和濕度 恙螨生活史各階段在發(fā)育生長過程中，喜在溫暖、潮濕，可在13℃~35℃生長發(fā)育，適宜溫度為18℃~28℃，最適宜溫度為23℃~28℃。濕度為80%~100%；中山醫(yī)科大學寄生蟲學教研室恙蟲病媒介室在長期的培養(yǎng)恙螨的實驗室溫度為25±1℃，濕度為80%~100%。
4. 培養(yǎng)所需的動物宿主 恙螨的生活史包括七個時期，卵、次卵、幼蟲、若蛹、若蟲、成蛹和成蟲。其中幼蟲期必須行寄生生活才能進入到下一階段的發(fā)育。因此，在實驗室培養(yǎng)時，需要動物宿主供恙螨度過寄生階段。恙螨對宿主的選擇不是很嚴格，包括哺乳類、鳥類、爬行類、兩棲類及節(jié)肢動物等。同一種的恙螨幼蟲可寄生在多種動物宿主體上。在實驗室進行恙螨培養(yǎng)時，小白鼠是首選的動物宿主，常選用3周齡、無東方體感染純系健康的BALB/C小鼠。
5. 實驗室常規(guī)恙螨培養(yǎng)和傳代 野鼠體上檢獲的恙螨飽食幼蟲或孳生地捕獲的成蟲或若蟲，或實驗室恙螨未食幼蟲叮咬小鼠后檢獲的飽食幼蟲，置碳粉石膏粉培養(yǎng)管培養(yǎng)，密度以每管不超過30個恙螨為好。恙螨移入培養(yǎng)管后，沿管壁滴加入水分，或管豎在盛有清水（水深約0.5cm)的搪瓷盆或玻璃皿中，使石膏層和碳粉層潮濕，保持管內(nèi)濕度80%~100%。將培養(yǎng)管置于25±1℃的光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一般隔天往石膏碳粉管中加水一次以保持濕度。同時定時移去管塞，在顯微鏡或解剖鏡下觀察培養(yǎng)的恙螨，清除培養(yǎng)管中霉菌等污物，并飼以新鮮蚤卵。
食物是培養(yǎng)恙螨的關鍵。恙螨的食性較復雜，對食物有一定的選擇性。多數(shù)恙螨喜歡動物性食物，尤其是小節(jié)肢動物卵和早期幼蟲，包括同種和異種的恙螨卵和蛹。國外曾報告用蚊卵飼養(yǎng)印度囊棒恙螨獲得成功。中山醫(yī)科大學寄生蟲學教研室恙蟲病媒室在培養(yǎng)地里纖恙螨過程中，發(fā)現(xiàn)地里纖恙螨在饑餓時可吸食蚊卵或其他昆蟲卵，但效果并不理想。用蚊卵喂食的恙螨，一般發(fā)育遲緩，壽命較短，產(chǎn)卵極少且成活率低，有的甚至不產(chǎn)卵；用新鮮蚤卵喂飼的地里纖恙螨則生長發(fā)育良好，產(chǎn)卵孵出的幼蟲健康，成活率高且幼蟲數(shù)量多。故實驗室均喜選用新鮮蚤卵作為培養(yǎng)恙螨的食物。
在實驗室培養(yǎng)過程中，恙螨在成蛹羽化變成成蟲約1周后，雌蟲就開始產(chǎn)卵。由于恙螨的幼蟲必須要在宿主體上寄生吸食才能繼續(xù)發(fā)育，因此，當發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)管中恙螨卵孵化出幼蟲時，需要把幼蟲用解剖針移至盛水的培養(yǎng)碟，以備叮咬宿主。目前實驗室均用自動叮咬宿主吸食法使幼蟲吸食。一般先將選擇的宿主動物（小白鼠)用乙醚麻醉，用解剖針將預先準備的浮于水面上的恙螨未食蚴移置鼠耳殼內(nèi)，同時用放大鏡或解剖鏡觀察，如有幼蟲爬出小鼠耳殼外，需重新將其挑入耳窩，等幼蟲全部叮咬穩(wěn)后，稍等片刻便把小白鼠放回鐵絲鼠籠，再將該籠置于帶水的搪瓷盆上，一般48h后，恙螨幼蟲已吸飽，麻醉小鼠，檢獲飽食幼蟲。置石膏碳粉管培養(yǎng)。
6. 純系恙螨的培養(yǎng)和傳代 由于科研工作的需要，有時要求恙螨是單一品系的培養(yǎng)。單一品系的恙螨必須通過純系恙螨培養(yǎng)才能獲得。純系培養(yǎng)是從一對雌雄成蟲開始，連續(xù)傳代培養(yǎng)多代后獲得純系品種。
恙螨培養(yǎng)至成蛹后，每個成蛹單獨分管培養(yǎng)，等羽化為成蟲，鑒別性別后，進行配對。每一培養(yǎng)管放置1對雌雄成蟲培養(yǎng)，培養(yǎng)方法按常規(guī)。雌蟲產(chǎn)卵孵出幼蟲后，使未食幼蟲叮咬純系健康的BALB/C小鼠，48h后幼蟲飽食，麻醉小鼠挑出飽食蚴，置干凈的石膏碳粉管繼續(xù)培養(yǎng)，經(jīng)若蛹、若蟲、成蛹和成蟲，產(chǎn)卵孵出幼蟲，再行叮咬傳代培養(yǎng)，不斷重復傳代，至25代以上就可以獲得大量的純系恙螨，供科研工作調(diào)用。
（一)動物宿主體上采集恙螨幼蟲 野外捕獲的恙螨動物宿主，有時捕獲時動物如已死，在這種情況下，為防止恙螨幼蟲的逃逸，可用白紙分開包著，注明采集地點、日期后，置于白布袋或塑料袋內(nèi)，扎緊袋口，帶回實驗室檢查。如野外捕獲的動物宿主未死，用乙醚麻醉或用鐵鉗處死后，進行檢查收集恙螨；一般用眼科鑷或解剖針將宿主全身遍查以后，再檢查不同的部位，如耳殼、眼緣、鼻腔、乳頭、肛孔、外生殖器或翅上等，特別是小哺乳動物的耳殼內(nèi)。如見有白色或桔黃色的，集聚成堆（或團)的恙螨幼蟲，用眼科尖鑷、解剖針或金屬耳括挑取。如叮咬著的恙螨幼蟲未飽食，則不易取下；或恙螨幼蟲數(shù)量多，又來不及檢取時，也可將恙螨連同叮咬部位，一起剪切下來，置于小玻璃碟內(nèi)，再將這碟放置于裝有一淺水的搪瓷盤內(nèi)，過l~2d，多數(shù)恙螨幼蟲就自行落下，漂浮于水面，再用毛筆或解剖針挑取。
（二)自然界采集恙螨幼蟲、若蟲和成蟲
1. 動物誘捕法 用活的小白鼠裝入小鐵絲籠，置于草地或其他要調(diào)查的地方，一般是下午7時放，次晨7時收回，小鼠放24h后檢查鼠身上是否又恙螨幼蟲叮咬。
2. 漂浮法 取地面表層取泥土約500cm3，傾入盛有約2／3容量的清水玻璃缸內(nèi)，用鐵勺攪拌，靜止片刻，恙螨和其他昆蟲將漂浮在水面上，收集漂在水面上的恙螨生活史各期蟲體。
3. 黑色小板或黑色膠板誘法 準備漆成黑色的黑色小板、黑色膠板或是黑色x線膠片，面積為10cm×10cm。將小黑板等放置所調(diào)查的地方， 一定時間（如10min)后，檢取聚集在板上的恙螨幼蟲。
4. 碟誘法 把白色碟子置于要調(diào)查的地方，隔夜收回，檢查收集爬入碟子上的恙螨幼蟲。
5. 光誘法 用一定面積的一張厚紙，中開一窗（一定面積)，加蓋透明紙，鋪于要檢查的地方，過一定時間，檢取聚積在窗孔的恙螨。
一般實驗室常用玻片法制成玻片標本保存�，F(xiàn)場常用液浸法，即將采得的恙螨幼蟲，立即放入70％酒精的指管內(nèi)，管里放一標簽，用軟鉛筆在簽上注明采集號、采集地點、日期、宿主、采集者，再裝滿酒精，用脫脂棉塞緊，放入盛有酒精的玻璃瓶中，保存。
亦可將采得的標本投入氯醛膠中，或用氯醛膠封固制片，保存。片上貼標簽。據(jù)王菊生等的經(jīng)驗，用此法保存的標本，以后制片的效果更好。
捕獲的各種動物，可剝制作成整體標本，保存，待后鑒定。
所有采集情況都應詳盡記錄，記錄應包括采集編號、宿主號、宿主、采集地點、采集地環(huán)境、恙螨種類和寄生部位及數(shù)量以致保存方法等。
1. 玻片標本制作
（1)非染色標本制作 將保存在70％酒精內(nèi)的恙螨幼蟲幼蟲置于小四方玻碟的蒸餾水中洗滌數(shù)分鐘。自蒸餾水粘取一個恙螨幼蟲，放于載玻片正中的一滴氯醛膠內(nèi)；在解剖鏡下，恙螨的位置調(diào)正，使其背面朝上，體與玻片垂直；然后輕輕蓋上小蓋片（大小為22mm×22mm或18mm×18mm)。最好是一張載玻片上只封一個恙螨。如同種恙螨標本較多，在一張載玻片上封2個或更多的標本時，應使標本一半背面朝上，一半腹面朝上，并整齊的排成一行或兩行，以便于觀察。將制好的標本平放在標本盤上，再置于35℃~40℃的溫箱內(nèi)，直到制片膠完全干固。在玻片標本干燥的過程中，應注意觀察，如標本的膠部分干了，即用解剖針自蓋片側面添膠。在標本封膠完全烘干后，于蓋片的周緣，加添丙酮賽璐珞液、加拿大膠或蠟（2份)與松香（7份)混合劑，便于長期保存。在顯微鏡下，鑒定蟲種，并在玻片的兩側貼上標簽（標簽包括中文名、學名、宿主、采集地點、編號、日期、采集者)。
（2)染色標本制作 將保存在70 9／6酒精或氯醛膠內(nèi)的幼蟲取出，放于蒸餾水中5~10min。移至1％酸性復性acid fuchsin內(nèi)染色6~12h；在蒸餾水中沖洗；用氯醛膠封固；
3. 暫時性處理標本 恙螨幼蟲放于載玻片上，加l滴酒精酚混合劑（無水酒精5單位，酚95單位)或冰醋酸，蓋上蓋玻片。觀察后，仍可轉入酒精內(nèi)或用氯醛膠制片，保存。
