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臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué):第九章 人絨毛膜促性腺激素檢查

成熟女性因受精的卵子移動到子宮腔內(nèi)著床后,形成胚胎,在發(fā)育成長為胎兒過程中,胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生大量的人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG),可通過孕婦血液循環(huán)而排泄到尿中。當(dāng)妊娠1-2.5時,血清和尿中的HCG水平即可迅速升高,第8郛周達(dá)到…

成熟女性因受精的卵子移動到子宮腔內(nèi)著床后,形成胚胎,在發(fā)育成長為胎兒過程中,胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生大量的人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG),可通過孕婦血液循環(huán)而排泄到尿中。當(dāng)妊娠1-2.5時,血清和尿中的HCG水平即可迅速升高,第8郛周達(dá)到高峰,至郛期第4個月始降至中等水平,并一直維持到妊娠末期。(圖9-1)

圖9-1 正常妊娠婦女血清中HCG平均值

HCG是由兩個非共價鍵相連的肽鏈組成的糖蛋白激素。其單個亞基不具有生物活性,當(dāng)連接成完整化合物時始具活性,分子量約為4.7萬。其主要功能就是刺激黃體,有利于雌激素黃體酮持續(xù)分泌,以促進(jìn)了宮蛻膜的形成,使胎盤生長成熟。HCGα亞單位的氨基酸排列與黃體生長激素(LH)α亞單位相似,故用完整的抗HCG分子的抗體測定HCG時與LH間有免疫交叉反應(yīng)。但它們的β亞單位各不相同。因此為避免交叉反應(yīng),目前均采用高將近的抗β-HCG單克隆抗體進(jìn)持特異的HCG檢查,近年來還有報道采用抗β-HCG羧基末端肽單克隆抗體以進(jìn)一步提高檢測的敏感性和特異性。

(一)膠乳凝集抑制試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)

1960年Wide及Gemzell開始采用膠乳凝集抑制試驗(yàn)(latex agglutinationinhibitiontest,LAIT)技術(shù)測定尿中HCG,即將尿液與抗 HCG血清作用后,加入已吸附抗原的膠乳,如尿中含HCG較多,則先與抗 HCG結(jié)合,不再有多余的抗 HCG與膠乳產(chǎn)生凝集而仍呈均勻的乳膠狀,是為陽性。相反,不含HCG尿不與抗血清作用,當(dāng)加入吸附抗原的膠乳后,抗血清可與膠乳抗原反應(yīng),出現(xiàn)明顯的“特”特性凝集顆粒,即為陰性。也可利用血細(xì)胞的血凝抑制試驗(yàn)bhskgw.cn(hemoagglutinationinhibition test,HAIT),其原理與膠乳法一致只是載體由膠乳改成羊紅細(xì)胞。這兩種試驗(yàn)方便簡便,靈敏度為100-500Mu/ML,適合大批標(biāo)本檢查,但因特異性差,不能定量,已逐漸被單克隆抗體法所取代。

(二)放射免疫試驗(yàn)(RIA)

利用放射標(biāo)記的HCG與被檢測尿中的HCG競爭性地結(jié)合抗-HCG抗體,當(dāng)被檢尿中HCG增加時,結(jié)合物的放射性減低,與不同含量標(biāo)準(zhǔn)品對比可測尿中HCG的含量。使定量檢測成為可能。

由于RIA需一定設(shè)備,試驗(yàn)手續(xù)繁甭,且有核素污染問題,不適用于臨床常規(guī)應(yīng)用。

(三)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)

該方法目前已廣泛應(yīng)用于臨床,其基本原理是運(yùn)用夾心免疫酶分析技術(shù)。即采用HCG單克隆抗體包被于固相表面,樣品中的HCG都將與支持物表面的抗體相結(jié)合。與樣品一孵育后,沖洗耳恭聽表面,然后加入特異性酶標(biāo)抗β-HCG亞基的單克隆抗體,最后加入酶作用的基質(zhì),即產(chǎn)生顏色。該法可目測,靈感度為20-50Mu/ml,采用抗β-HCG單克隆抗體二點(diǎn)酶免疫法進(jìn)行定量,靈敏度可達(dá)2-10mU/ml。目前免疫酶法進(jìn)一步發(fā)展為更簡便、適于病人自檢的一步法,即免疫酶滲透試驗(yàn)。

(四)單克隆抗體膠體金試驗(yàn)

免疫膠體金法是將羊抗人HCG抗血清(多抗)、羊鼠IGG分別固定特制的纖維素試帶上并呈兩條線上下排列,羊抗鼠IGG線在試帶知上方為陰性對照,羊抗人HCG多抗在下方為測定。試帶條中含均勻分布的膠體金標(biāo)記鼠抗人β-HCG單克隆抗體和無關(guān)的金標(biāo)記鼠IGG。檢測時將試帶浸入被檢尿液中(液面低于固定的兩條抗體線)后迅速取出。尿液沿試帶上行,尿中的β-HCG在上行過程中與膠體金標(biāo)記單克隆抗體結(jié)合,待行至羊抗人HCG抗體線時,形成金標(biāo)記的β-HCG單元抗尿HCG羊抗人HCG復(fù)合物而在試帶上呈茲紅色區(qū)帶,為HCG陽性反應(yīng),試帶上無關(guān)的金標(biāo)記鼠IGG隨尿液繼續(xù)上行至羊抗鼠IGG處時與之形成紫紅色的金標(biāo)記的抗原體復(fù)合物是為陰性對照。判斷結(jié)果時,含HCG的尿液試帶可顯示上、下兩條紫紅色線條,而陰性標(biāo)本則只顯出上邊一條紫紅色線。

[方法學(xué)評價] 縱觀HCG檢查方法,有生物激動、化學(xué)法、免疫法等。幾種不同的HCG檢查方法比較見表9-1。免疫法的檢測手段不斷更新、向特異簡便、快速、普及方向發(fā)展,現(xiàn)已有膠乳或血凝抑制試劑、放射免疫、酶免疫、膠體金紙片法等。除診斷早期妊娠早孕釘,HCG檢查對病理妊娠職宮外孕及胎盤滋養(yǎng)層疾病的診斷、鑒別、治療及追蹤觀察等均有意義。

表9-1 幾種檢查HCG方法的比較

妊娠試驗(yàn)名稱靈敏度(mU/ml或IU/L)實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)用價值
雄蟾蜍(青)試驗(yàn)(MT)3000需合格動物、簡便需4-12小時不能定量已淘汰
膠乳凝集抑制試驗(yàn)(LAIT)100-500試劑易得、簡便,5min完成一般早孕,敏感性低不能定量,少用
紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)(HAIT)100-500試劑條件要求高2小時完成敏感性低,少用半定量
放射免疫試驗(yàn)(RIA)<2要求一定設(shè)備,條件要求高2小時完成試劑可定量,最靈敏,但很少應(yīng)用
bhskgw.cn聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)過篩法 多種形式,小珠、板、薄片包被,5-15min完成半定量,靈敏度好廣泛應(yīng)用
夾心酶免疫試驗(yàn)20-50試劑,免疫應(yīng)用板1-3小時可完成可定量,靈敏度高常應(yīng)用
免疫膠體金法10-251-15min完成半定量,靈敏度好廣泛應(yīng)用

[參考值] 妊娠不同時期以及各孕婦之間血清HCG絕對值變化大,一般非孕婦女血HCG<100IU/L,妊娠期間血清HCg 水平見表9-2。

在妊娠最初3個月,HCG水平每(2.2±0.5)天約升高一倍,尿HCG(HCG半定量法)非孕婦女<25IU/L,孕40天>5000IU/L,孕60-70天>(8-32)×104IU/L(清晨尿HCG水平最高,接近血清水平)。

表9-2 妊娠期間血清HCG水平

妊娠周數(shù)HCG(IU/L)
0.2-15-50
1-250-500
2-3100-5000
3-4500-10000
4-51000-50000
5-610000-100000
6-815000-200000
2-3月10000-100000

[臨床意義] HCG的檢查對早期妊娠診斷有重要意義,對與妊娠相關(guān)疾病、滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤等疾病的診斷、鑒別和病程觀察等有一定價值。

1.診斷早期妊娠:孕后35-50天HCG可升至大于2500IU/L。60-70天可達(dá)8萬萬IU/L,多胎妊娠者尿HCG常于一胎妊娠。

2.異常妊娠與胎盤功能的判斷:①異位妊娠:如宮外孕時,本試驗(yàn)只有60%的陽性率,在子燥出血3天后,HCG仍可為陽性,故HCG檢查可作為與其它腹癥的鑒別。HCG常為312-625IU/L。②流產(chǎn)診斷與治療:不完全流產(chǎn)如子宮內(nèi)尚有胎盤組織殘存,HCG檢查仍可呈陽性;完全流主或死胎時HCG由陽性轉(zhuǎn)陰性,因此可作為保胎或吸宮治療的參考依據(jù)。③先流產(chǎn):如尿中HCG仍維持高水平多不會發(fā)生難免流產(chǎn)。如HCG在2500IU/L以下,并逐漸下降,則有流產(chǎn)的或死胎的可能,當(dāng)降至600IU/L則難免流產(chǎn)。在保胎治療中,如HCG仍繼續(xù)下降說明保胎無將近,如HCG不斷上升,說明保胎成功。④在產(chǎn)后4天或人工流產(chǎn)術(shù)后13天,血清HCG應(yīng)低于1000IU/L,產(chǎn)后9天或人工流產(chǎn)術(shù)后25天,,血清HCG應(yīng)恢復(fù)正常。如不符合這一情況,則應(yīng)考慮有異?赡。

3.滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤診斷與治療監(jiān)測①葡萄胎、惡性葡萄胎、絨毛膜上皮癌及睪刃畸胎瘤等患者尿中HCG顯著升高,右可達(dá)10萬到數(shù)百萬IU/L,可用稀釋試驗(yàn)診斷如妊娠12周以前1:500稀釋尿液呈陽性,妊娠12周以后1:250稀釋尿液呈陽性,對葡萄胎診斷有價值。1:100-1:500稀釋尿液呈陽性對絨毛膜癌也有診斷價值,如男性尿中HCG升高,要考慮睪刃腫瘤如精原細(xì)胞癌、畸形及異位HCG瘤等。②滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤患者術(shù)后3周后尿HCG應(yīng)<50IU/L,8-12周呈陰性;如HCG不下降或不轉(zhuǎn)陰,提示可能有殘留病變,這類閏例常易復(fù)發(fā),故需定期檢查。

4.其它更年期、排卵及雙側(cè)卵巢切除術(shù)均可致黃體生成素升高,因LH與HCG的α肽鏈組成相同而使采用抗HCG抗體的妊娠試驗(yàn)陽性,此時可用β-HCG的單克隆二點(diǎn)酶免疫測定鑒別。內(nèi)分泌疾病中如腦垂體疾病、甲狀腺功能亢進(jìn)、婦科疾病如卵巢囊腫、子宮癌等HCG也可增高。近年來發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤如默契胎瘤、胰腺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、肺癌等血中HCG也可升高,因此將HCG看作是癌標(biāo)志物之一。但必需結(jié)合臨床情況及其它檢查結(jié)果綜合分析結(jié)果綜合分析判斷。

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