臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué):第九章　人絨毛膜促性腺激素檢查

成熟女性因受精的卵子移動(dòng)到子宮腔內(nèi)著床后，形成胚胎，在發(fā)育成長(zhǎng)為胎兒過程中，胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生大量的人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,HCG)，可通過孕婦血液循環(huán)而排泄到尿中。當(dāng)妊娠1-2.5時(shí)，血清和尿中的HCG水平即可迅速升高，第8郛周達(dá)到高峰，至郛期第4個(gè)月始降至中等水平，并一直維持到妊娠末期。（圖9-1)

圖9-1 正常妊娠婦女血清中HCG平均值

HCG是由兩個(gè)非共價(jià)鍵相連的肽鏈組成的糖蛋白激素。其單個(gè)亞基不具有生物活性，當(dāng)連接成完整化合物時(shí)始具活性，分子量約為4.7萬。其主要功能就是刺激黃體，有利于雌激素和黃體酮持續(xù)分泌，以促進(jìn)了宮蛻膜的形成，使胎盤生長(zhǎng)成熟。HCGα亞單位的氨基酸排列與黃體生長(zhǎng)激素（LH)α亞單位相似，故用完整的抗HCG分子的抗體測(cè)定HCG時(shí)與LH間有免疫交叉反應(yīng)。但它們的β亞單位各不相同。因此為避免交叉反應(yīng)，目前均采用高將近的抗β-HCG單克隆抗體進(jìn)持特異的HCG檢查，近年來還有報(bào)道采用抗β-HCG羧基末端肽單克隆抗體以進(jìn)一步提高檢測(cè)的敏感性和特異性。

（一)膠乳凝集抑制試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)

1960年Wide及Gemzell開始采用膠乳凝集抑制試驗(yàn)(latex agglutinationinhibitiontest,LAIT)技術(shù)測(cè)定尿中HCG，即將尿液與抗 HCG血清作用后，加入已吸附抗原的膠乳，如尿中含HCG較多，則先與抗 HCG結(jié)合，不再有多余的抗 HCG與膠乳產(chǎn)生凝集而仍呈均勻的乳膠狀，是為陽性。相反，不含HCG尿不與抗血清作用，當(dāng)加入吸附抗原的膠乳后，抗血清可與膠乳抗原反應(yīng)，出現(xiàn)明顯的“特”特性凝集顆粒，即為陰性。也可利用血細(xì)胞的血凝抑制試驗(yàn)bhskgw.cn(hemoagglutinationinhibition test,HAIT)，其原理與膠乳法一致只是載體由膠乳改成羊紅細(xì)胞。這兩種試驗(yàn)方便簡(jiǎn)便，靈敏度為100-500Mu/ML，適合大批標(biāo)本檢查，但因特異性差，不能定量，已逐漸被單克隆抗體法所取代。

（二)放射免疫試驗(yàn)（RIA)

利用放射標(biāo)記的HCG與被檢測(cè)尿中的HCG競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合抗-HCG抗體，當(dāng)被檢尿中HCG增加時(shí)，結(jié)合物的放射性減低，與不同含量標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比可測(cè)尿中HCG的含量。使定量檢測(cè)成為可能。

由于RIA需一定設(shè)備，試驗(yàn)手續(xù)繁甭，且有核素污染問題，不適用于臨床常規(guī)應(yīng)用。

（三)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)

該方法目前已廣泛應(yīng)用于臨床，其基本原理是運(yùn)用夾心免疫酶分析技術(shù)。即采用HCG單克隆抗體包被于固相表面，樣品中的HCG都將與支持物表面的抗體相結(jié)合。與樣品一孵育后，沖洗耳恭聽表面，然后加入特異性酶標(biāo)抗β-HCG亞基的單克隆抗體，最后加入酶作用的基質(zhì)，即產(chǎn)生顏色。該法可目測(cè)，靈感度為20-50Mu/ml,采用抗β-HCG單克隆抗體二點(diǎn)酶免疫法進(jìn)行定量，靈敏度可達(dá)2-10mU/ml。目前免疫酶法進(jìn)一步發(fā)展為更簡(jiǎn)便、適于病人自檢的一步法，即免疫酶滲透試驗(yàn)。

（四)單克隆抗體膠體金試驗(yàn)

免疫膠體金法是將羊抗人HCG抗血清（多抗)、羊鼠IGG分別固定特制的纖維素試帶上并呈兩條線上下排列，羊抗鼠IGG線在試帶知上方為陰性對(duì)照，羊抗人HCG多抗在下方為測(cè)定。試帶條中含均勻分布的膠體金標(biāo)記鼠抗人β-HCG單克隆抗體和無關(guān)的金標(biāo)記鼠IGG。檢測(cè)時(shí)將試帶浸入被檢尿液中（液面低于固定的兩條抗體線)后迅速取出。尿液沿試帶上行，尿中的β-HCG在上行過程中與膠體金標(biāo)記單克隆抗體結(jié)合，待行至羊抗人HCG抗體線時(shí)，形成金標(biāo)記的β-HCG單元抗尿HCG羊抗人HCG復(fù)合物而在試帶上呈茲紅色區(qū)帶，為HCG陽性反應(yīng)，試帶上無關(guān)的金標(biāo)記鼠IGG隨尿液繼續(xù)上行至羊抗鼠IGG處時(shí)與之形成紫紅色的金標(biāo)記的抗原體復(fù)合物是為陰性對(duì)照。判斷結(jié)果時(shí)，含HCG的尿液試帶可顯示上、下兩條紫紅色線條，而陰性標(biāo)本則只顯出上邊一條紫紅色線。

[方法學(xué)評(píng)價(jià)] 縱觀HCG檢查方法，有生物激動(dòng)、化學(xué)法、免疫法等。幾種不同的HCG檢查方法比較見表9-1。免疫法的檢測(cè)手段不斷更新、向特異簡(jiǎn)便、快速、普及方向發(fā)展，現(xiàn)已有膠乳或血凝抑制試劑、放射免疫、酶免疫、膠體金紙片法等。除診斷早期妊娠早孕釘，HCG檢查對(duì)病理妊娠職宮外孕及胎盤滋養(yǎng)層疾病的診斷、鑒別、治療及追蹤觀察等均有意義。

表9-1 幾種檢查HCG方法的比較

[參考值] 妊娠不同時(shí)期以及各孕婦之間血清HCG絕對(duì)值變化大，一般非孕婦女血HCG<100IU/L，妊娠期間血清HCg 水平見表9-2。

在妊娠最初3個(gè)月，HCG水平每（2.2±0.5)天約升高一倍，尿HCG（HCG半定量法)非孕婦女<25IU/L，孕40天>5000IU/L,孕60-70天>(8-32)×10⁴IU/L（清晨尿HCG水平最高，接近血清水平)。

表9-2 妊娠期間血清HCG水平

[臨床意義] HCG的檢查對(duì)早期妊娠診斷有重要意義，對(duì)與妊娠相關(guān)疾病、滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤等疾病的診斷、鑒別和病程觀察等有一定價(jià)值。

1．診斷早期妊娠：孕后35-50天HCG可升至大于2500IU/L。60-70天可達(dá)8萬萬IU/L，多胎妊娠者尿HCG常于一胎妊娠。

2．異常妊娠與胎盤功能的判斷：①異位妊娠：如宮外孕時(shí)，本試驗(yàn)只有60%的陽性率，在子燥出血3天后，HCG仍可為陽性，故HCG檢查可作為與其它腹癥的鑒別。HCG常為312-625IU/L。②流產(chǎn)診斷與治療：不完全流產(chǎn)如子宮內(nèi)尚有胎盤組織殘存，HCG檢查仍可呈陽性；完全流主或死胎時(shí)HCG由陽性轉(zhuǎn)陰性，因此可作為保胎或吸宮治療的參考依據(jù)。③先流產(chǎn)：如尿中HCG仍維持高水平多不會(huì)發(fā)生難免流產(chǎn)。如HCG在2500IU/L以下，并逐漸下降，則有流產(chǎn)的或死胎的可能，當(dāng)降至600IU/L則難免流產(chǎn)。在保胎治療中，如HCG仍繼續(xù)下降說明保胎無將近，如HCG不斷上升，說明保胎成功。④在產(chǎn)后4天或人工流產(chǎn)術(shù)后13天，血清HCG應(yīng)低于1000IU/L，產(chǎn)后9天或人工流產(chǎn)術(shù)后25天，，血清HCG應(yīng)恢復(fù)正常。如不符合這一情況，則應(yīng)考慮有異常可能。

3．滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤診斷與治療監(jiān)測(cè)①葡萄胎、惡性葡萄胎、絨毛膜上皮癌及睪刃畸胎瘤等患者尿中HCG顯著升高，右可達(dá)10萬到數(shù)百萬IU/L，可用稀釋試驗(yàn)診斷如妊娠12周以前1：500稀釋尿液呈陽性，妊娠12周以后1：250稀釋尿液呈陽性，對(duì)葡萄胎診斷有價(jià)值。1：100-1：500稀釋尿液呈陽性對(duì)絨毛膜癌也有診斷價(jià)值，如男性尿中HCG升高，要考慮睪刃腫瘤如精原細(xì)胞癌、畸形及異位HCG瘤等。②滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤患者術(shù)后3周后尿HCG應(yīng)<50IU/L,8-12周呈陰性；如HCG不下降或不轉(zhuǎn)陰，提示可能有殘留病變，這類閏例常易復(fù)發(fā)，故需定期檢查。

4．其它更年期、排卵及雙側(cè)卵巢切除術(shù)均可致黃體生成素升高，因LH與HCG的α肽鏈組成相同而使采用抗HCG抗體的妊娠試驗(yàn)陽性，此時(shí)可用β-HCG的單克隆二點(diǎn)酶免疫測(cè)定鑒別。內(nèi)分泌疾病中如腦垂體疾病、甲狀腺功能亢進(jìn)、婦科疾病如卵巢囊腫、子宮癌等HCG也可增高。近年來發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤如默契胎瘤、胰腺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、肺癌等血中HCG也可升高，因此將HCG看作是癌標(biāo)志物之一。但必需結(jié)合臨床情況及其它檢查結(jié)果綜合分析結(jié)果綜合分析判斷。