中國(guó)生物制品規(guī)程:精制抗毒素制造及檢定規(guī)程

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本規(guī)程適用于白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽及肉毒四種精制抗毒素。精制白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽、肉毒抗毒素系分別由各該抗毒素的馬血漿經(jīng)胃酶消化后用硫酸銨鹽析法制得的液體或凍干抗毒素球蛋白制劑。分別用于各該疾病的預(yù)防和治療。1　制造1.1對(duì)血漿的要求1.1.1制造精制抗毒素…

本規(guī)程適用于白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽及肉毒四種精制抗毒素。

精制白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽、肉毒抗毒素系分別由各該抗毒素的馬血漿經(jīng)胃酶消化后用硫酸銨鹽析法制得的液體或凍干抗毒素球蛋白制劑。分別用于各該疾病的預(yù)防和治療。

1　制造

1.1對(duì)血漿的要求

1.1.1制造精制抗毒素的血漿，應(yīng)符合附錄1《抗毒素生產(chǎn)用馬匹免疫方法》的規(guī)定。在保存期間如發(fā)一周明顯的溶血、染菌及其他異�，F(xiàn)象，不得投入生產(chǎn)。

1.1.2血漿的抗毒素效價(jià)不得低于下列要求：

血漿種類每瓶血漿效價(jià)（IU/ml)

白喉1000

破傷風(fēng)1000

威氏250

膿毒300

水腫550

溶組織550

A型肉毒1000

B型肉毒600

E型肉毒600

以上效價(jià)均以動(dòng)物測(cè)定方法為準(zhǔn)。

1.2制造程序

1.2.1消化

1.2.1.1第1法

血漿用2～4倍水稀釋，調(diào)節(jié)pH至3.2～3.6，加入胃酶適量及甲苯0.2%～0.4%（ml/ml)，于29～31℃消化1～1.5小時(shí)。

1.2.1.2第2法

血漿用2～4倍水稀釋，調(diào)節(jié)pH至3.6～4.0，加入胃酶適量及甲苯0.2%～0.4%（ml/ml)，于22±℃消化20～22小時(shí)。

1.2.2第1次沉淀及加熱處理。

每100ml消化液加硫酸銨14～16g，白喉及破傷風(fēng)抗毒素調(diào)節(jié)pH至4.8～5.6，氣性壞疽及肉毒抗毒素調(diào)節(jié)pH至4.5～5.0；白喉、破傷風(fēng)、氣性壞疽抗毒素加溫至57～57℃，肉毒抗毒素加溫至50～52℃，均保持30分鐘。加溫終了，盡速降溫至45℃以下，分離，取清液。

1.2.3第2次沉淀

上述清液調(diào)節(jié)pH至7.0～7.4，每100ml加硫酸銨19～21g，分離，取沉淀，壓干。

上述沉淀用水稀釋至蛋白含量不超過2%（g/ml)，加明礬不少于0.8%(g/ml)，調(diào)節(jié)pH至7.7～7.9，分離，取清液。

1.2.5濃縮

1.2.5.1第1法

將上述清液第100ml加硫酸銨38g，分離，取沉淀，壓干。沉淀物透析至硫酸銨含量0.1%（g/ml)以下。

1.2.5.2第2法

將上述清液混合，通過超濾裝置進(jìn)行超濾，濃縮至硫酸銨含量為0.1%（g/ml)以下。

1.2.6最后處理

上述透析后的血清進(jìn)行下列處理：

1.2.6.1調(diào)整固體總量不超過20%（g/ml)。蛋白含量不超過17%（g/ml)。

1.2.6.2加氯化鈉使最終含量為0.9%（g/ml)。

1.2.6.3加三氯甲烷使最終含量為0.5%（ml/ml)或硫柳汞液使最終含量為0.01%(g/ml)為防腐劑。用于制造凍干抗毒素者只用三氯甲烷為防腐劑。

1.2.6.4調(diào)節(jié)pH至6.0～7.0。

1.2.6.5除菌過濾，并做無菌試驗(yàn)。

1.2.7凍干

經(jīng)除菌過濾及半成品檢定合格的精制抗毒素，可用凍干法制成干燥制品。

1.3對(duì)制造工藝的要求及規(guī)定

1.3.1制造室內(nèi)部裝修材料應(yīng)便于清潔消毒，地面耐腐蝕，室內(nèi)盡可能低溫，力爭(zhēng)做到無菌操作。

1.3.2所用儀表和量具應(yīng)精密準(zhǔn)確，并經(jīng)常校正。一切與血漿接觸的器皿、用具等，應(yīng)注意不染有熱原質(zhì)，不含有毒物物質(zhì)。消化液加熱處理前后的器皿、用具須嚴(yán)格處理。未經(jīng)處理的器皿、用具不得用于不同批。

1.3.3所用化學(xué)原料的規(guī)格應(yīng)不低于化學(xué)純（三級(jí)純)或符合《中國(guó)生物制品主要原材料試行標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定。胃酶應(yīng)力求活力高，粘液素含量少，類A血型物質(zhì)含量低，并經(jīng)過活力單位及類A血型物質(zhì)含量測(cè)定。制造用水，應(yīng)采取有效措施防止污染或產(chǎn)生熱原質(zhì)。

1.3.4抗毒素精制的每步操作均應(yīng)盡量除凈非抗毒素蛋白質(zhì)，以提高制品純度。

1.3.5制造過程中加酸、堿及硫酸銨等時(shí)，速度不宜過快，避免局部濃度過高；酸、堿原液嘗試不宜超過2mol/L。操作時(shí)應(yīng)盡量避免產(chǎn)生大量泡沫。應(yīng)采取有效措施防止染菌和產(chǎn)生熱原質(zhì)。除必要的操作時(shí)間外，應(yīng)盡量縮短生產(chǎn)周期。

1.3.6制造過程中必須嚴(yán)格執(zhí)行《生物制品分批規(guī)程》，不得將中間回收品并入不同批內(nèi)。制造批號(hào)不同但制造方法與所含防腐劑相同并經(jīng)檢定（無菌試驗(yàn)、安全試驗(yàn)、熱原質(zhì)試驗(yàn))合格的半成品可進(jìn)行合并，但合并批數(shù)不得超過2批。多價(jià)制品，其各單價(jià)半成品合并時(shí)，亦應(yīng)符合上述原則。

1.3.7關(guān)于精制抗毒素再制的規(guī)定

1.3.7.1凡屬下列范圍的半成品及成品，可予再制。

（1)熱原質(zhì)試驗(yàn)結(jié)果陽性者。

（2)非肉眼可見而通過無菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的染菌，經(jīng)過濾不能除菌者。

（3)理化檢定不合格者。

（4)成品裝量不足者。

（5)超過效期的庫存制品。

（6)種類及制造方法相同，批號(hào)及數(shù)量清楚的分裝檢損品及濾器沖洗液可合并再制（但該批再制品的分裝檢損品應(yīng)予廢棄)。

1.3.7.2再制方法可根據(jù)具體情況制定，但制成后的質(zhì)量必須符合檢定要求。

1.3.8多價(jià)氣性壞疽抗毒素按下列單位比例進(jìn)行混合。

威氏：水腫：膿毒=2∶2∶1。

必要時(shí)可加入1份溶組織抗毒素。

1.3.9制成之精制抗毒素，須在冷暗處保存至少1個(gè)月作為穩(wěn)定期。

1.4半成品檢定

由制造部門進(jìn)行理化檢定、無菌試驗(yàn)、安全試驗(yàn)、熱原質(zhì)試驗(yàn)、類A血型物質(zhì)測(cè)定及效價(jià)測(cè)定。效價(jià)測(cè)定、類A血型物質(zhì)測(cè)定及熱原質(zhì)試驗(yàn)可與質(zhì)量檢定部門會(huì)同進(jìn)行。檢定方法及要求同成品檢定。

2　成品檢定

由質(zhì)量檢定部門進(jìn)行全面檢定，半成品已會(huì)同檢定的項(xiàng)目可抽檢。

2.1鑒別試驗(yàn)

每批成品至少抽取一瓶作以下鑒別試驗(yàn)：

2.1.1作動(dòng)物中和試驗(yàn)（同效價(jià)測(cè)定)或免疫擴(kuò)散試驗(yàn)，以驗(yàn)證本品系瓶簽標(biāo)示的抗毒素。

2.1.2用兔抗馬血漿的兔Igg　與本品作免疫擴(kuò)散試驗(yàn)，以驗(yàn)證本品為馬血清蛋白成分（如同一制造室無其他動(dòng)物免疫血清生產(chǎn)，本試驗(yàn)可免做)。

2.2理化檢定

2.2.1外觀

液體精制抗毒素應(yīng)為幾乎無色或淡黃色的澄明液體，不得含有渣�；虍愇�，長(zhǎng)期貯存后可有微量能搖散的沉淀產(chǎn)生。除血清本身及防腐劑的特有氣味外，不得有其他氣味。凍干精制抗毒素應(yīng)為白色或微帶粉紅色的疏松體，加入規(guī)定量蒸餾水后輕輕搖動(dòng)，應(yīng)于15分鐘內(nèi)完全溶解。溶解后的外觀應(yīng)與液體精制抗毒素相同。

2.2.2固體總量及蛋白含量

液體精制抗毒素以及凍干制品的安規(guī)定量溶解后，固體總量不得超過20%（g/ml)。蛋白含量不得超過17%（g/ml)。

2.2.3pH值應(yīng)為6.0～7.0。

2.2.4氯化鈉含量應(yīng)為0.85%～0.95%(g/ml)。

2.2.5硫酸銨含量

液體精制抗毒素以及凍干制品按規(guī)定量溶解后，均不得超過0.1%（g/ml)。

2.2.6液體精制抗毒素的防腐劑，用三氯甲烷者不得超過0.5%bhskgw.cn/wszg/（mlg/ml)，用硫柳汞者不得超過0.01%（g/ml)。

2.2.7凍干bhskgw.cn精制抗毒素水分含量不得超過3%。

2.2.8電泳檢查

將樣品稀釋至2%蛋白濃度，做瓊脂糖電泳分析，應(yīng)不含或僅含痕量白蛋白遷移率的蛋白。

2.2.9F（ab)2含量

用SDS-PAGE法（見《生物制品化學(xué)檢定規(guī)程》)測(cè)定，預(yù)防用抗毒素的F（ab)2含量不得低于50%，治療用抗毒素的F（ab)2含量不得低于60%。