二、紫外及可見光譜在黃酮類化合物鑒別中的應(yīng)用
1.測(cè)定樣品在甲醇溶液中的UV光譜。
2.測(cè)定樣品在甲醇溶液中加入各種診斷試劑后得到的UV及可見光譜。常用的診斷試劑有甲醇鈉(NaOMe)、乙酸鈉(NaOAc)、乙酸鈉-硼酸(NaOAc-H3B03)、三氯化鋁(AlCl3)及三氯化鋁-鹽酸(AlCl3-HCl)等。
3.如樣品為苷類，則可先進(jìn)行水解，或甲基化后再水解，并測(cè)定苷元或其衍生物的UV光譜。各種診斷試劑的詳細(xì)配制方法及測(cè)定程序可參看有關(guān)文獻(xiàn)。
(一)黃酮類化合物在甲醇溶液中的UV光譜特征
黃酮、黃酮醇等多數(shù)黃酮類化合物，因分子中存在如下所示的桂皮酰基及苯甲�；M成的交叉共軛體系，故其甲醇溶液在200～400nm的區(qū)域內(nèi)存在兩個(gè)主要的紫外吸收帶，稱為峰帶Ⅰ(300～400nm)及峰帶Ⅱ(220～280nm)。
1.黃酮及黃酮醇類
兩者UV光譜譜形相似，但帶Ⅰ位置不同，可據(jù)此進(jìn)行分類：黃酮帶Ⅰ<350nm，黃酮醇帶Ⅰ>350nm。
2.查耳酮及橙酮類
共同特征是帶Ⅰ很強(qiáng)，為主峰;而帶Ⅱ則較弱，為次強(qiáng)峰。
3.異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇
這三類化合物中，除有由A環(huán)苯甲酰系統(tǒng)引起的帶Ⅱ吸收(主峰)外，因B環(huán)不與吡喃酮環(huán)上的羰基共軛(或共軛很弱)，故帶Ⅰ很弱，常在主峰的長(zhǎng)波方向處有一肩峰。
根據(jù)主峰的位置，可以區(qū)別異黃酮與二氫黃酮及二氫黃酮醇類。前者在245～270nm，后兩者在270～295nm。
(二)加入診斷試劑后引起的位移及其在結(jié)構(gòu)測(cè)定中的意義
1.加入診斷試劑后黃酮及黃酮醇類化合物的紫外光譜幾種主要的診斷試劑引起的位移及其結(jié)構(gòu)特征歸屬見表6-9。
表6-9 加入診斷試劑的黃酮及黃酮醇類化合物UV圖譜及結(jié)構(gòu)特征的歸屬
三、氫核磁共振在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用
(一)A環(huán)質(zhì)子
1.5,7-二羥基黃酮類化合物
其中，H-6及H-8將分別作為二重峰(J=2.5Hz)，出現(xiàn)在δ5.70～6.90區(qū)域內(nèi)，且H-6信號(hào)總是比H-8信號(hào)位于較高的磁場(chǎng)區(qū)。當(dāng)7-OH成苷時(shí)，則H-6及H-8信號(hào)均向低磁場(chǎng)方向位移。
2.7-羥基黃酮類化合物
A環(huán)上有H-5、H-6、H-8三個(gè)芳香質(zhì)子。
H-5因有C-4位羰基強(qiáng)烈的負(fù)屏蔽效應(yīng)的影響，以及H-6的鄰偶作用，將作為一個(gè)二重峰(J=Ca. 9.0Hz)出現(xiàn)在δ8.0左右，位于比其他芳香質(zhì)子較低的磁場(chǎng)。H-6因有H-5鄰偶(J=Ca. 9.0Hz)及H-8間偶(J=2.5Hz)的作用，將表現(xiàn)為一個(gè)雙二重峰。H-8因有H-6的間位偶合作用，故顯現(xiàn)為一個(gè)裂距較小的二重峰 (J=2.5Hz)。
(二)B環(huán)質(zhì)子
1.4′-氧取化黃酮類化合物
B環(huán)質(zhì)子分為H-3′，H-5′和H-2′，H-6′兩組，各以相當(dāng)于2個(gè)氫的雙峰信號(hào)((J=8.5Hz)出現(xiàn)在δ6.5～7.9區(qū)域。H-3′，H-5′的化學(xué)位移總是比H-2′，H-6′的化學(xué)位移值小。
2.3′，4′-二氧取代黃酮類化合物
H-5′為d峰(J=8.5Hz)，出現(xiàn)在δ6.70～7.10處。H-2′(d，J=2.5Hz)和H-6′(dd，J=8.5、2.5Hz)，出現(xiàn)在δ7.20～7.90范圍。
3.3′，4′，5′-三氧取代黃酮類化合物
H-2′及H-6′將作為相當(dāng)于兩上質(zhì)子的一個(gè)單峰，出現(xiàn)在δ6.50～7.50范圍內(nèi)。
(三)C環(huán)質(zhì)子
1.黃酮醇類
因?yàn)镃環(huán)上沒有質(zhì)子，因此沒有特征峰。
2.黃酮類
該類化合物的H-3常常作為一個(gè)尖銳的單峰信號(hào)出現(xiàn)在δ6.30左右。
3.異黃酮類
異黃酮上的H-2，因正好位于羰基的β位，且通過碳與氧相接，故將作為一個(gè)單峰出現(xiàn)在比一般芳香質(zhì)子較低的磁場(chǎng)區(qū)(δ7.60～7.80)。
4.二氫黃酮及二氫黃酮醇
(1)二氫黃酮
H-2與兩個(gè)磁不等同的H-3偶合，故作為一個(gè)雙二重峰出現(xiàn)，中心位于δ5.20處。兩個(gè)H-3，因有相互偕偶及H-2的鄰偶，將分別作為一個(gè)雙二重峰出現(xiàn)，中心位于δ2.80處，但兩組峰常有相互重疊現(xiàn)象。
(2)二氫黃酮醇
在天然存在的二氫黃酮醇中，H-2及H-3多為反式雙直立鍵，故分別作為一個(gè)二重峰出現(xiàn)(J=Ca.11.0Hz)。H-2位于δ4.90前后，H-3則位于δ4.30左右，兩者很容易區(qū)分，據(jù)此還可確定C-2及C-3的相對(duì)構(gòu)型，即兩質(zhì)子互為反式。
(四)糖上的質(zhì)子
(五)C6-CH3及C8-CH3質(zhì)子
(六)乙酰氧基的質(zhì)子
(七)甲氧基上的質(zhì)子
除若干例外，甲氧基質(zhì)子信號(hào)一般在δ3.50～4.10處出現(xiàn)。
四、碳核磁共振在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用
黃酮類化合物13C-NMR信號(hào)的歸屬一般可以通過：①與簡(jiǎn)單的模型化合物如苯乙酮、桂皮酸以及它們的衍生物的圖譜進(jìn)行比較醫(yī)學(xué)全.在.線.提供. bhskgw.cn;②用經(jīng)驗(yàn)性的簡(jiǎn)單芳香化合物的取代基位移加和規(guī)律進(jìn)行計(jì)算等方法加以解析。
B型題：
A.山奈酚
B.芹菜素
C.大豆素
D.二氫山奈酚
E.二氫芹菜素
1：1H-NMR譜中母核質(zhì)子出現(xiàn)在最低場(chǎng)(化學(xué)位移7.82單峰)的是
[答疑編號(hào)111060201]
『正確答案』C
2：1H-NMR譜中母核質(zhì)子有三組四重峰，偶合常數(shù)分別為11Hz，5Hz，17Hz，該化合物是
[答疑編號(hào)111060202]
『正確答案』E
3：1H-NMR譜中母核質(zhì)子有一對(duì)雙重峰，偶合常數(shù)等于11Hz，該化合物是
[答疑編號(hào)111060203]
『正確答案』D
4：1H-NMR譜中可以見到6.49的單峰，該化合物是
[答疑編號(hào)111060204]
『正確答案』B
5：1H-NMR譜中沒有C環(huán)的質(zhì)子信號(hào)，該化合物是
[答疑編號(hào)111060205]
『正確答案』A
第五節(jié) 含黃酮類化合物的中藥實(shí)例
一、黃芩
從中分離出來的黃酮類化合物有黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素。其中黃芩苷是主要有效成分，具有抗菌、消炎作用。此外，還有降轉(zhuǎn)氨酶的作用。黃芩苷的苷元是黃芩素，黃芩素的磷酸酯鈉鹽可用于治療過敏、喘息等疾病。
黃芩苷三個(gè)最主要的結(jié)構(gòu)特征。
1.它是黃酮類化合物，三位是沒有羥基的，是一個(gè)黃酮類成分。
2.在A環(huán)上有鄰二酚羥基取代。
3.它是一個(gè)葡萄糖醛酸苷。
黃芩苷幾乎不溶于水，難溶于甲醇、乙醇、丙酮，可溶于熱乙酸。遇三氯化鐵顯綠色，遇乙酸鉛生成橙紅色沉淀。溶于堿及氨水中初顯黃色，不久則變?yōu)楹谧厣�。黃芩苷可用水煎煮加酸沉淀的辦法提取。
二、葛根
葛根主要含異黃酮類化合物，主要成分有大豆素、大豆苷、葛根素。大豆素屬于苷元，大豆苷和葛根素都屬于苷。大豆苷和葛根素都屬于苷，大豆苷和葛根素的苷元是相同的，都是大豆素。大豆苷和葛根素雖然都是大豆素的苷，但所形成的苷是不一樣的。大豆苷是一個(gè)氧苷，而葛根素是一個(gè)碳苷。
葛根總異黃酮有增加冠狀動(dòng)脈血流量及降低心肌耗氧量等作用。大豆素、大豆苷、葛根素他們既沒有三羥基也沒有五羥基，分子結(jié)構(gòu)中也沒有鄰二酚羥基，因此，在分離葛根總黃酮時(shí)就可以用氧化鋁柱色譜法分離。
三、銀杏葉
銀杏葉中所含的黃酮結(jié)構(gòu)類型比較多，包括黃酮、黃酮醇及其苷類，也包括兒茶素類和雙黃酮類。其中最典型的是含有雙黃酮類化合物，銀杏葉中的黃酮類化合物有擴(kuò)張冠狀血管和增加腦血流量的作用。
四、槐米
槐米里含有的有效成分是蘆丁。它的苷元是槲皮素，可用于治療毛細(xì)血管變脆引起的出血癥，并用作高血壓的輔助治療劑。
蘆丁和槲皮素是一組非常重要的黃酮類化合物。從結(jié)構(gòu)類型上講屬于黃酮醇類蘆丁分子中因含有鄰二酚羥基，性質(zhì)不太穩(wěn)定，暴露在空氣中能緩緩變?yōu)榘岛稚�，在堿性條件下更容易被氧化分解。蘆丁在水當(dāng)中的溶解度與溫度有很大關(guān)系，冷水里溶解度極差，而熱水里溶解度又很高，因此，在從槐米里提取蘆丁時(shí)主要就是利用了這一性質(zhì)選擇水煎或堿水提取的辦法。但在堿性條件下，蘆丁分子結(jié)構(gòu)中有因?yàn)橛朽彾恿u基很容易發(fā)生結(jié)構(gòu)的變化，所以在用堿水提取時(shí)要加少量的硼砂進(jìn)去，因?yàn)榕鹕澳苓_(dá)到保護(hù)鄰二酚羥基的目的。
五、陳皮
陳皮的主要成分是橙皮苷，結(jié)構(gòu)類型屬于二氫黃酮，橙皮苷具有和蘆丁相同的用途。橙皮苷幾乎不溶于冷水，在乙醇或熱水中溶解度較大，可溶于吡啶、甘油和乙酸。在中藥陳皮里提取橙皮苷時(shí)也能選擇堿提酸沉的辦法。
六、滿山紅
滿山紅中主要含有杜鵑素。從結(jié)構(gòu)類型上講杜鵑素也屬于二氫黃酮。杜鵑素是祛痰成分，臨床用于治療慢性支氣管炎。杜鵑素與鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈粉紅色，加熱后變?yōu)槊倒寮t色，與FeCl3反應(yīng)呈草綠色。
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