免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在研究和診斷自身免疫性疾病中的應(yīng)用

　　在自身免疫性疾病的診斷中，目前常常用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢查相應(yīng)的自身抗體作為重要診斷依據(jù)之一，并以此探討自身免疫性疾病發(fā)生的免疫機(jī)理。

　　用免疫熒光法可以檢查的自身抗體日益增多，具有器官特異性的自身抗體如甲狀腺球蛋白抗體和甲狀腺微粒體抗體，甲狀腺第二膠質(zhì)抗體，腎上腺抗體，胃壁細(xì)胞抗體，皮膚表皮間粘合質(zhì)（Intercellular Cement of epidermis)抗體和基底細(xì)胞層抗體，唾液腺導(dǎo)管細(xì)胞抗體，胰島細(xì)胞抗體，腎小球基底膜抗體，結(jié)腸粘膜上皮多糖物質(zhì)抗體，精子抗體，卵巢抗體，胃G細(xì)胞抗體等。

　　用免疫熒光法可以檢查出的非器官特異性自身抗體，有抗核抗體，平滑肌抗體，線粒體抗體、橫紋肌抗體、神經(jīng)髓鞘（外周)抗體、抗網(wǎng)狀纖維抗體等。

　　還有報(bào)告用免疫熒光法檢查血細(xì)胞自身抗體如抗白細(xì)胞（淋巴細(xì)胞)、紅細(xì)胞，血小板抗體等。

　　一、抗核抗體（Antinuclear antibodies, ANA)的檢測(cè)

　　Friou等（1957)首先用免疫熒光法檢查出存在于SLE病人血清中的NAN，Alexander和Duthie（1958)證實(shí)了Friou等的結(jié)果。Friou等（1958)檢查了28例SLE病人血清中有27例ANA陽(yáng)性。一例陰性屬臨床長(zhǎng)期不活動(dòng)性病人。以后大量報(bào)告都指出用免疫熒光間接法檢查ANA對(duì)于臨床診斷SLE有重要價(jià)值，其陽(yáng)性率在80%～100%之間，陽(yáng)性對(duì)于SLE病有確診價(jià)值，但陰性不能完全排除SLE，因?yàn)樯贁?shù)活動(dòng)性SLE其ANA可能維持陰性，F(xiàn)essel氏認(rèn)為可能是一種亞型。正常人0%～4%，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)　炎、皮肌炎、硬皮病、sjogeren’s綜合征，混合性結(jié)締組織病、慢性活動(dòng)性肝炎等多種疾病也呈不同程度的ANA陽(yáng)性率，ANA可能是一種自身免疫反應(yīng)的一個(gè)重要指標(biāo)。ANA在各種疾病中的百分率見(jiàn)表15-1。

表15-1 抗核抗體在各種疾病中的百分率

　　Hargraves對(duì)狼瘡細(xì)胞（1948)已進(jìn)行了大量的研究，證明引起狼瘡細(xì)胞發(fā)生的因子，為抗核成分的抗體�？购丝贵w是一組對(duì)細(xì)胞核內(nèi)DNA，RNA或組蛋白、或這些物質(zhì)的分子復(fù)合物的自身抗體，目前發(fā)現(xiàn)至少有十七種。這些抗核抗體對(duì)于結(jié)締組織病的致病病因的探討和臨床診斷均有重要幫助。這些結(jié)締組織病各有不同的抗核抗體譜（Antinuclear Antibodies profile)。

　　目前，國(guó)內(nèi)已建立了11種測(cè)定方法，提高了結(jié)締組織病的診斷水平。

　　用作檢查ANA的抗原很多，如雞的紅細(xì)胞核，人白細(xì)胞，皮膚，甲狀腺、脾臟、淋巴瘤、胸腺、腎、羊膜細(xì)胞、頰細(xì)胞等，還有Hela細(xì)胞，大小白鼠的肝和腎冰凍切片（4～6μm)等，以成年小白鼠的肝切片最為常用。用動(dòng)物細(xì)胞核作抗原，可以避免血型的干擾因素。Konice氏等（1978)報(bào)告用馬疫錐蟲(chóng)（Trypanosoma equiperdum, TE)作抗原測(cè)定SLE病人血清中抗雙鏈DNa （dsDNA)因TE的核和動(dòng)基體為不含蛋白的純dsDNA，抗原性純一，特異性強(qiáng)，不需提純，為天然的dsDNA底物，據(jù)認(rèn)為抗dsDNA抗體為SLE所特有，一些研究指出dsDNA抗體與SLE病情活動(dòng)及狼瘡腎炎的發(fā)病機(jī)理有密切關(guān)系，持續(xù)高滴度的抗dsDNA抗體是狼瘡腎炎的不祥之兆。

　　1．抗核抗體的熒光形態(tài)及臨床意義ANA的熒光形態(tài)和其相應(yīng)抗原有密切關(guān)系，ANA的抗原性質(zhì)和自身免疫性疾病有關(guān)，所以，觀察熒光形態(tài)與臨床診斷可能有一定聯(lián)系。

　　（1)周邊型（或稱核周型)：可見(jiàn)熒光以核邊緣強(qiáng)，核輪鮮明，靠核膜的熒光呈絨毛狀，核中心熒光弱或無(wú)。這是天然DNA或去氧核糖蛋白的抗體產(chǎn)生的一種熒光形態(tài)，肝細(xì)胞核，腎小管上皮細(xì)胞核和雞紅細(xì)胞核較典型。常見(jiàn)于活動(dòng)性系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人血清中。藥物引起的狼瘡樣綜合征也常出現(xiàn)。這些病人病情嚴(yán)重，腎受累的約占56%，與疾病進(jìn)行性發(fā)展和狼瘡細(xì)胞現(xiàn)象密切相關(guān)。

　�。�2)均質(zhì)型（或稱彌散型)：可見(jiàn)全核呈均勻一致的黃綠色熒光，核輪廓明確。血清中這種抗體用脫氧核糖蛋白吸收可以消除。證明是由核蛋白抗體（主要是IgG類(lèi))與核中脫氧核糖蛋白反應(yīng)的結(jié)果。此種熒光形態(tài)常見(jiàn)于活動(dòng)性系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人，偶見(jiàn)于惡性病或結(jié)締組織病。滴度多在1：160以上。如將血清適當(dāng)稀釋即可出現(xiàn)其它染色形態(tài)，證明其中尚有其他熒光形態(tài)的抗體混在其中。弱陽(yáng)性均質(zhì)型意義不明，供血員有3%～10%的陽(yáng)性。

　�。�3)斑點(diǎn)型（或稱小結(jié)型)：核輪廓不鮮明，核內(nèi)呈斑點(diǎn)狀熒光。由核內(nèi)Sm抗原引起的一種抗體，包括IgG、IgM或IgA三類(lèi)抗體。當(dāng)用原血清染色時(shí)，斑點(diǎn)呈大團(tuán)塊狀，稀釋血清時(shí)變?yōu)榉稚⒌陌唿c(diǎn)狀。主要見(jiàn)于硬皮病及肢端動(dòng)脈痙攣�。ɡ字Z氏病)，也見(jiàn)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡。

　�。�4)核仁型：僅是核仁呈現(xiàn)黃綠色熒光，血清中此類(lèi)抗體較少見(jiàn)。用肝細(xì)胞核和培養(yǎng)細(xì)胞作抗原可以檢查出來(lái)。因血片中粒細(xì)胞及正常淋巴細(xì)胞中缺乏核仁抗原，檢查不出此抗體。此型抗體可有IgG、IgM或IgA類(lèi)。最常見(jiàn)于系統(tǒng)性硬化癥、硬皮病、皮肌炎和sjogren’s綜合征，其他膠原病很少見(jiàn)。

　　其次，還可見(jiàn)核膜型、結(jié)節(jié)　樣網(wǎng)狀型等，沒(méi)有明確的診斷意義。ANA的相應(yīng)抗原和熒光類(lèi)型見(jiàn)表15-2。

表15-2 ANA的相應(yīng)抗原和熒光類(lèi)型

　　2．ANA的滴度與病情的關(guān)系Tablonska等的研究認(rèn)為活動(dòng)期紅斑狼瘡ANA的滴度在1：160或更高，國(guó)內(nèi)的報(bào)告滴度在≥1：80則顯示病情的活動(dòng)性，滴度高是系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷的依據(jù)之一，高滴度與病情活動(dòng)性相平行。高俊達(dá)（1979)對(duì)于ANA滴度變化的臨床意義研究指出，60例系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人血清中ANA滴度的變化與病情活動(dòng)性、臟器損害、預(yù)后和其他化驗(yàn)指標(biāo)的關(guān)系如下：

　�。�1)ANA滴度在1：80～160以上有80.5%屬臨床活動(dòng)性，有89.5%～97.8%緩解期病人在1：160以下。

　　（2)ANA滴度變化與臨床癥狀是一致關(guān)系，但先于疾病的活動(dòng)而升高，后于癥狀的緩解而下降。

　　（3)ANA滴度變化與狼瘡細(xì)胞、血沉、尿蛋白和血清γ球蛋白含量異常一致。

　�。�4)ANA滴度可作強(qiáng)的松用量的選擇參考，ANA滴度在1：160以上者要加緊積極治療，1：40以下者可減至維持量。

　　ANA的免疫組織化學(xué)檢查對(duì)于診斷沒(méi)有皮膚損害的紅斑狼瘡病幫助更大，取病人的皮膚作冰凍切片，用ANa IgG熒光抗體直接法染色，可見(jiàn)在表皮與真皮連接處顯示熒光帶。Tuffanelli報(bào)告病人有皮膚損害，直接免疫熒光檢查ANA的陽(yáng)性率為90%，在正常皮膚中紅斑狼瘡病人ANA的陽(yáng)性率可達(dá)56%，而后者在其他疾病極少見(jiàn)，因而有較大的診斷意義。

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